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目的：本项研究主要探讨DNA甲基转移酶(deoxyribonucleicacidmethyltransferases,DNMTs)和Ⅰ类组蛋白去乙酰化酶(histonedeacetylases,HDACs)在卵巢癌组织和卵巢正常组织中的表达差异及它们在卵巢癌的发生、发展、转移中所起的作用,及对卵巢癌中miR-221、146b和106b表达的调节,为深入研究卵巢癌的发生、发展机制,及其早期诊断和治疗奠定基础。
方法：22例新鲜的临床手术切除的卵巢癌组织标本(19例浆液型癌,3例粘液型癌),8例正常卵巢组织(绝经期妇女或其它疾病必须手术切除者)及卵巢癌细胞系SKOV3、3AO、H08910,提取总RNA并逆转录。应用Real-time定量PCR分析癌组织、正常组织、细胞系中DNMTs和Ⅰ类HDACsmRNA的表达水平,以及miR-221、miR-146b和miR-106b在这些标本中的表达。随后对DNMTs和Ⅰ类HDACsmRNA表达水平最显著的SKOV3细胞进行深入研究,采用细胞计数和绘制生长曲线的方法分析SKOV3细胞经DNMT和HDAC的抑制剂5-Aza-CdR和PBA单独和联合处理后的细胞增殖水平的变化;应用划痕试验分析SKOV3细胞在表观抑制剂处理后的迁移能力的改变;使用蛋白印迹技术(Westernblotting)分析抑制剂处理后SKOV3细胞的CyclinD1、BCL-2、P53的蛋白水平。最后采用Real-time定量PCR分析药物处理后SKOV3细胞中miR-221、miR-146b、miR-106b表达水平的变化。
结果：相对于正常卵巢组织,卵巢癌组织中DNMT1、DNMT3b和Ⅰ类HDACs的mRNA水平明显高表达,特别是DNMT1和HDAC2在两组间有显著性差异,P值分别为0.0092和0.0078,并且表达程度随着临床病理分期增加而增加,而DNMT3a在两组间没有显著差异。miR-221和miR-146b在卵巢癌中表达低于正常组织(P=0.0129,P=0.0374),且随着临床病理分期增加而减低,miR-106b在卵巢癌中高表达(P=0.0093),不同病理分期间无差异。在SKOV3、3AO、H08910三个细胞系中,DNMT1,DNMT3b,HDAC1～3、8,miR-146b,miR-221,miR-106b的表达水平有差异,其中在SKOV3细胞中最为显著。5-Aza-CdR和PBA处理后的SKOV3细胞,细胞生长明显受到抑制。划痕实验结果显示PBA对细胞迁移无明显影响,而5-Aza-CdR对细胞迁移有显著抑制作用,两种抑制剂联合作用对细胞迁移抑制更为显著。Westernblotting分析显示两种抑制剂单独或联合作用后CyclinD1、BCL-2的蛋白水平明显下降,而P53蛋白水平显著上调。两种表观抑制剂作用SKOV3细胞后miR-221和miR-146b水平有显著改变。
结论：DNMT1、DNMT3b和Ⅰ类HDACs在卵巢癌组织中高表达,它们在对卵巢癌的发生、发展、迁移中起了一定的作用。miR-221、146b、106b在卵巢癌中表达水平均有所改变,表观抑制剂能改变其表达水平。这些酶和miRNA有可能作为卵巢癌诊断和判断病程的一个重要指标。