研究目的:建立家族性皮肤黏膜静脉畸形相关突变TIE2-R849W的斑马鱼模型并初步探究可能的致病机制。研究方法:1.基于人源TIE2 cDNA序列,通过PCR点突变法,合成TIE2-R849W突变基因表达体系并测序验证;2.将TIE2-R849W质粒转录后,利用mRNA显微注射技术,基于fli1a:EGFP转基因斑马鱼构建TIE2-R849W过表达斑马鱼模型;3.荧光显微镜下记录斑马鱼尾静脉丛(caudal vein plexus,CVP)的早期发育改变并定量化比较,记录相关发育改变,针对特殊表型行组织学切片检查;4.提取斑马鱼RNA,针对目标基因行实时定量PCR(qRT-PCR),随后利用已有基因芯片进一步验证结论。研究结果:1.成功构建并验证TIE2-R849W表达载体,利用该载体建立了遗传性静脉畸形相关突变TIE2-R849W的斑马鱼模型;2.TIE2-R849W过表达显著影响了斑马鱼早期尾静脉丛的发育,表现为尾静脉丛窦腔数量及面积的显著减少;3.TIE2-R849W过表达引发了斑马鱼眼球、下颌骨及前脑等颅面部结构的发育缺陷;4.据qRT-PCR结果,TIE2-R849W引发pik3r2、foxo1b的表达上调,而对于同尾静脉丛发育相关的基因,除了显著高表达的egfl7外,nr2f2、nr2f1a和s1pr1均未见明显异常;而同颅面部畸形有关的wnt信号通路,TIE2-R849W同样引发了显著上调;5.对比体外芯片结果,芯片部分突变组内的tie2、pik3r2、foxo1b、egfl7、wnt9a、lrp5和dkk1同样存在一致的高表达现象。研究结论及意义:1.通过斑马鱼模型基本明确了TIE2-R849W在静脉早期发育过程的致病地位;2.遗传性静脉畸形相关突变TIE2-R849W可引发斑马鱼尾静脉丛的发育异常,该异常可能同Egfl7的高表达联系密切;3.Wnt通路在TIE2-R849W引发的斑马鱼头部发育异常中可能占据重要地位,为进一步研究头颈部器官发育异常提供新的思路。