本文主要从以下几个部分展开论述：　　第一部分 藏红花药材及其成药的Real-time PCR定量检测　　中药材及中成药的质量控制是中药现代化、国际化的关键环节，近年来，基于DNA分子鉴定的质量控制方法已被广泛应用于中药及中成药的真伪鉴别，但是关于利用定量PCR技术对中药进行定量测定的工作却没有报道。藏红花（Crocus sativus L.）是一种在复方成药制剂中广泛应用的贵细药材，指标成分为藏红花素类(Crocin)，但是该类成分还存在于栀子等药材，采用高效液相色谱(HPLC)等化学分析方法难以确认药材粉末或者复方成药制剂中藏红花投料的真实性。本论文第一部分主要利用Real-time PCR（实时荧光PCR）技术，建立了藏红花药材的Real-time PCR定量检测体系，并将其应用到中成药的含量测定中。　　第一部分主要包括以下三个内容:　　1.以藏红花药材作为研究目标，将藏红花药材及其常见伪品如红花（Garthamus tinctorius L.）、莲须（Chrysanthemum.chanetii.）、玉米须（Zea mays l.）的ITS2序列进行比对分析，设计出扩增和检测藏红花的特异性引物及探针，对体系中引物、探针、镁离子、DNA聚合酶浓度等进行了优化，建立了藏红花药材的Real-time PCR定量检测体系。　　2.利用荧光定量PCR技术对一系列不同重量药材的DNA提取物进行分析，通过荧光扩增Ct值与药材重量对数值的线性关系首次证明了药材重量与药材DNA含量之间的线性关系。　　3.接下来对影响荧光定量分析结果的因素，包括药材的前处理、DNA提取等进行了方法学考察，同时对该方法的特异性、普适性、准确性和重复性等进行了考察。　　4.利用已建立的藏红花药材的Real-time PCR定量检测体系对人为掺假的藏红花和其伪品的混合物以及含有藏红花的中成药-二十五味珊瑚丸中的藏红花含量进行了测定，并通过加样回收实验验证了方法的准确性。　　第二部分 超快速核酸扩增方法-VPCR的建立及其应用　　PCR（Polymerase Chain Reaction聚合酶链式反应）是一种核酸扩增技术，目前已广泛的应用于临床诊断、法医鉴定、环境监测等多个领域。目前，一个常规的PCR反应通常需要一个小时左右，随着核酸检测进入临床应用，包括感染性疾病、肿瘤、心血管疾病以及神经紊乱疾病等在内的多种疾病均依靠对特定DNA进行扩增而实现，所以，开发快速PCR的方法，缩短PCR反应的时间，对提高临床检测效率，实现POC(point-of-care)现场检测都具有非常重要的意义。目前快速PCR技术的发展主要集中在对PCR仪器的改造上，研究者通过使用各种手段提高升降温速率而达到缩短扩增时间的目的。本论文的第二部分内容主要是在现有PCR仪器和PCR体系下，开发了一种超快速核酸扩增方法，并对其定量的能力、特异性、普适性等做了详细的考察。　　第二部分主要包括以下三个内容:　　1.假设验证:传统PCR技术中变性、退火和延伸三个步骤的温度维持时间可以省略，聚合酶链式反应可以在动态的升降温过程中完成。进而在此基础上建立了一种超快速核酸扩增方法-VPCR;并利用实时荧光的方法对其扩增过程进行了研究。　　2.对VPCR当中涉及到的高温度TH、最低温度TL、引物的长度、升降温速率等多个扩增参数对扩增过程的影响进行了分析。　　3.对VPCR技术的定量能力、特异性、普适性等相关参数进行了考察，并对VPCR技术能够达到的最短扩增时间进行了探索性研究。