前言 脑梗死是人类死亡和致残的重要疾病之一。研究危险因素导致脑梗死的启动因子及其发生机制，可为预防脑梗死的发生提供新的途径。 血管内皮细胞参与构成血管的通透性屏障，血管内皮损伤是血栓形成的最重要因素。吸烟被认为是导致动脉粥样硬化并发展成为临床心脑血管事件的主要危险因素之一。ICAM-1在脑血栓形成中具有重要作用。白细胞通过ICAM-1的介导与血管内皮细胞粘附，并释放一些炎症介质和细胞因子，引起更多的白细胞粘附于血管壁，成为血栓形成的基础。本实验建立大鼠吸烟模型，检测大鼠脑血管内皮细胞ICAM-1mRNA的表达，阐明吸烟与大鼠脑血管内皮细胞ICAM-1mRNA表达的关系，探讨吸烟导致脑血栓形成的分子机制。 实验材料与方法 健康雄性Wistar大鼠50只，体重200～210克。随机平均分为5组：长期大量吸烟组(20支/天，吸75天)、长期少量吸烟组(8支/天，吸75天)、短期大量吸烟组(20支/天，吸30天)、戒烟组(20支/天，吸45天，戒烟30天)、正常对照组(不吸烟)。以有机玻璃，不锈钢丝及角钢，空气泵，胶皮管等制成吸烟鼠盒。 大鼠吸烟至规定日期，常规灌流固定，断头取脑。冰冻切片(厚15um)，原位杂交检测大鼠脑血管内皮细胞ICAM-1mRNA的表达，OLYMPUS数码相机图像采集，显微图像分析系统对复染前杂交切片进行灰度分析，计算每例动物皮质内脑血管内皮细胞胞浆染色平均灰度，SPSS软件进行方差分析及多重比较。 结 果 各组大鼠脑血管内皮细胞胞浆均出现阳性信号（棕黄色颗粒儿 以长期大量吸烟组胞浆染色最深（胞浆浓染呈深棕黄色人短期大量与长期少量吸烟组染色弱于长期大量组，戒烟组染色较浅，对照组染色最浅。 方差分析显示各实验组 ICAM－lmRNA染色平均灰度值总体上差异有统计学意义门＜0．05人 多重比较示：①与对照组比较，ICAM叫，除戒烟组外，表达差异均有统计学意义冲＜O．05厂②与戒烟组比较，ICAM则 为短期大量、长期大量吸烟组表达差异有统计学意义河＜0．05厂③短期大量与长期大量吸烟组比较差异有统计学意义u＜0．05八④长期少量与长期大量吸烟组比较其差异有统计学意义o＜0．05人 各组大鼠脑血管内皮 ICAM－lmRNA染色均数分布图说明吸烟与血管内皮细胞 ICAM－lmRNA表达间存在剂量一效应关系。 讨 论 血管内皮细胞hndothelial cell，EC）的结构和功能障碍对脑血管病的发生、发展有极重要作用。各种危险因素致AS的同时也引起EC的损害或功能障碍。目前普遍认为EC损伤是AS发生早期事件。内皮细胞表面可以表达许多粘附分子，它们可作为配基与血液循环中的白细胞在缺血区脑组织聚集、浸润。 ·2· ICAM司属于粘附分子中免疫球蛋白超家族，其通过与白细胞表面的LFA一互相结合，介导白细胞与内皮细胞的粘附及随后的白细胞跨内皮细胞的转移作用。在病理情况下，ICAM－l在血管内皮的表达明显升高，使白细胞与血管内皮细胞之间的粘附力增加，后者释放炎症介质与细胞因子，吸引更多的白细胞粘附于血管壁，起始炎症反应，改变了局部的血流动力学环境；粘附聚集的白细胞释放氧自由基和蛋白水解酶，导致局部血管内皮细胞水肿变形，甚至坏死，这些均构成血栓的病变基础。血管内皮细胞ICAMJ的表达增加是脑血栓形成的早期事件。 Zhang等报道，脑中 ICAM－lmRNA在局灶性脑缺血二小时即出现，10 ／J’时达到高峰。Soriano等用不能表达ICAM－l的纯合子小鼠与能表达ICAM－l的野生型小鼠做相同的脑梗塞模型，发现后者脑梗死的面积是前者的5．6－7．8倍，且前者梗死区血流量大，生存率高。Zhang等在大鼠大脑中动脉阻塞2 ／J’时后再灌注1小时，应用ICAM－l单克隆抗体，发现缺血性脑损伤面积明显减小。上述实验提示ICAM人表达上调能增加大脑梗塞范围，内皮细胞ICAM－1表达增强有引起脑血管血栓的作用。 本实验中各组大鼠脑血管内皮细胞均表达 ICAM－lmRNA，以长期大量吸烟组表达最多（染色最深入 短期大量与长期少量吸烟组次之，戒烟组再次，正常对照组表达最低（染色浅入单因素方差分析结果显示，吸烟导致大鼠脑血管内皮细胞ICAM－lmRNA表达不同，各组间表达差异具有统计学意义；进一步作组间成对均值比较结果显示：二．与对照组比较 ICAM八，除戒烟组外，表达差异均具有统计学意义u＜0．05八2．与戒烟组比较 ICAM人 为短期大量、长期大量吸烟组表达差异具有统计学意义泽＜0．05八3．短期大量与长期大量吸烟组比较差异有统计学意义u＜o．05＊4．长期少量与长期大量吸烟组比较其差异有统计学意义瞩＜o．05人吸烟与血管内 ·3·皮细胞 ICAM－lmRNA表达间存在剂量一效应关系。 吸烟致大鼠脑血管内皮细胞 ICAM－lmRNA表达增加，调节ICAM！分泌增加，超过生理条件下机体自身的负反馈调节机制，使白细胞与血管内皮细胞?