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为了寻找与大肠癌发生发展相关的新的分子标志，浙江大学肿瘤研究所应用减式杂交技术，从正常人肠粘膜组织cDNA文库中筛选得到46个克隆。通过与NCBI基因数据库进行同源性比较分析，发现其中有32个与免疫球蛋白基因高度同源。而SNC73基因为32个克隆之一，其cDNA全长为1651个核苷酸，共编码494个氨基酸(Genbank登录号为：AF067420)。生物信息学分析表明：SNC73基因编码产物的N端142个氨基酸为免疫球蛋白V区，其中包括一个由20个氨基酸组成的信号肽；而C端的352个氨基酸与免疫球蛋白A1(IgA1)的重链恒定区(Genbank登录号为：AAC82528.1)完全同源。经In-situ Max原位荧光杂交分析确定，SNC73基因定位于染色体14q32。这些结果提示SNC73基因实际上就是免疫球蛋白A1的重链(IgHα1)。 原位杂交显示，SNC73基因的mRNA主要在结肠粘膜的上皮细胞中表达；而RT-PCR分析也表明SNC73基因的mRNA在多种上皮来源的肿瘤细胞系中存在表达；同样应用免疫组织化学方法检测到IgA1重链蛋白在肠上皮细胞中的表达。由此，郑树等提出了非淋巴来源的上皮细胞中可能存在免疫球蛋白A1表达的假设。 经典的免疫学理论认为：只有B淋巴细胞才能合成和分泌免疫球蛋白。肠腔中的IgA是由淋巴细胞产生并经肠上皮细胞进入肠腔而发挥局部抗感染作用 浙 江 大 学 硕 士 研 究 生 毕 业 论 文的（即肠上皮细胞中存在“过路”的免疫球蛋白A）。但最近有研究表明，非淋巳来源的上皮细胞可以表达免疫球蛋白。Kimoto报道在4种上皮来源的肿瘤细胞系中存在免疫球蛋白重链恒定区及T细胞抗原受体基因的mRNA表达；邱晓彦等在多种不同上皮来源的肿瘤细胞系中检测到免疫球蛋白样物质的表达；而曹亚等发现，从人鼻咽癌细胞株CNEZ分离出来的具有转化活性的TX基因与免疫球蛋白Kappa链基因的恒定区高度同源，提示两者可能是同一基因。 以上这些结果均表明非淋巴来源的卜皮细胞中存在免疫球蛋白重链或轻链的表达。但有关非淋巴来源的上皮细胞是否能够表达完整的免疫球蛋白AI分子以及是否存在免疫球蛋白基因的V（D）J重组体系还未见报道。同时，为了进一步验证郑树等提出的上皮细胞可以表达免疫球蛋白川的假设。为此，本课题着重就 IgA在上皮细胞中的表达及其重组机制这两方面的问题进行研究。第一部分：免疫球蛋白AI基因在上皮来源的肿瘤细胞系中的表达研究 采用RTPCR和免疫组织化学方法检测了SNC73基因在结肠癌细胞系LOVO和 SW480、子宫颈癌细胞系HeLa、肝癌细胞系 SMC7721和乳腺癌细胞系 Bcap37中的表达。为了避免DNA污染对实验结果的影响，用于PCR扩增的SNC73基因的上下游引物分别设计在两个外显子上。结果显示5株细胞中均有SNC73基因的 mRNA和相应蛋白的表达，其核着酸序列与 SNC73（Genbank登录号为：AF067420）100％同源。采用免疫组织化学方法分别检测了 5株细胞中免疫球蛋白 AI重链（IgHal）、免疫球蛋白 Kappa链和 Lambda链的表达。结果表明 5株细胞中均存在IgHal和相应轻链的表达，其免疫球蛋白轻链均为Kappa型，而Lambda型均为阴性。第二部分：免疫球蛋白AI基因在上皮来源的肿瘤细胞系中的重组机制的研究 采用 RTPCR和 Western blotting印迹杂交方法检测了上述 5株表达 IgA的细胞系的重组激活基因 1／2（Recombination activating genesl／2，RAGI／2）的表达。结果显示 5株细胞均存在 RAG／2基因的 mRNA和相应蛋白的表达，其核着酸序列和蛋白质分于量（RAGI为 11 skD，RAGZ为 58kD）与淋巴细胞表达的 2 浙 江 大 学 硕 士 研 究 生 毕 业 论 文RAGo完全相同。应用RTPCR方法检测了3个免疫球蛋白基因增强于调节因于一EBF（早期 B细胞因子）、EZA和 Paxs的表达。结果显示 5株细胞中调节因子均有不同的表达，其中＊＊F在5株细胞系中均有表达，而均不表达＊ZA：只有SW480细胞系表达Paxs。 以上结果证实非淋巴来源的上皮细胞中存在与B淋巴细胞内相同的完整的IgA分子（包括重链和轻链人 是与在 B淋巴细胞内相类同的，通过 V（D）J重组而形成。结论：1．上皮来源的肿瘤细胞系中存在免疫球蛋白AI重链和轻链的表达，即存在完 整的 IgA分子。其轻链的形式为 Kappa型。2．上皮来源的肿瘤细胞系中存在 RAG和 RAGZ两个基因的 mRNA和蛋白质 的表达，其核着酸序列和蛋白质分子量（分别为 118kD和 58 kD）与淋巴细 胞表达的RAGS完全一致。3．上皮来源的肿瘤细胞系中存在EBF的表达，其序列与淋巴细胞来源的EBF 100％同源。但不表达EZA；SW480细胞系还表达Paxs基因，其序列与淋巴 细胞表达的Paxs完全相同。4．上皮来源的肿瘤细胞系中存在V（DV重组体系。5．上度来源的肿瘤细胞系表达的IgAI可能是与在B淋巴细胞内相类同的，通 过V（D厂重组而形成。