论文部分内容阅读
目的：研究实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental autoimmuneencephalomyelitis,EAE)大鼠脑脊液(Cerebrospinal fluid,CSF)中IgG对EAE大鼠病情的影响,为多发性硬化清除CSF中自身抗体的治疗提供实验证据。
方法：采用髓鞘碱性蛋白68-86与弗氏完全佐剂免疫雄性Lewis大鼠建立EAE模型(n=8),观察发病时间、病情达峰时间及疾病严重程度,确定后续IgG干预实验的时间点。观察EAE大鼠CSF中IgG的浓度变化规律并确定收集IgG的时间点(n=32)。在免疫后第15、16天连续收集两天CSF,将所有收集到的CSF混合(n=95),采用亲和纯化法分离EAE大鼠CSF中的IgG并纯化、浓缩,最终配制成含高浓度IgG的人工CSF。另选40只Lewis大鼠诱导EAE模型(方法同前),并随机分为4组,分别为A1组及其对照A2组,B1组及其对照B2组。在诱导第8天经枕大池分别向A1组和B1组大鼠CSF内注入100ul含IgG的人工CSF,向A2组和B2组大鼠CSF内注入100ul不含IgG的人工CSF,每日记录大鼠的临床评分；在发病高峰期(免疫后第13天)终止A1组和A2组实验；在发病缓解期(免疫后第21天)终止B1组和B2组实验。终止实验时处死动物,取腰骶段脊髓行HE染色、髓鞘染色研究。通过临床评分及病理学改变评估CSF中的IgG对于EAE病情严重程度的影响。
结果：雄性Lewis大鼠EAE模型发病率为100％,免疫后第9-11天起病,第21天临床症状完全恢复。EAE大鼠CSF中IgG的增减变化趋势与临床评分变化趋势类似。提纯的IgG纯度大于85％,回收率大于90％。A1和A2组在各个时间点的临床评分没有显著的统计学差异(第9天:0.200±0.422,0.100±0.316,P=0.556:第10天:0.700±0.675,0.500±0.707,P=0.526；第11天:1.700±0.675,1.500±0.850,P=0.567；第12天:2.700±823,2.500±0.707,P=0.567；第13天:3.200±0.789,3.00±0.667,P=0.548)。脊髓组织有明显的炎性细胞浸润,A1和A2组细胞计数分别为99.30±13.29,96.10±10.17,两组间炎性细胞计数不存在显著性差异(P=0.553)。B1和B2组在各个时间点的临床评分不存在显著的统计学差异(第14天:3.000±0.667,2.800±0.632,P=0.500；第15天:2.700±0.483,2.500±0.527,P=0.388；第16天:2.300±0.483,2.000±0.471,P=0.177；第17天:1.900±0.568,1.800±0.422,P=0.660；第18天:1.200±0.427,1.300±0.675,P=0.696；第19天:1.000±0.471,0.800±0.422,P=0.331；第20天:0.400±0.516,0.200±0.422,P=0.355)。脊髓组织仅见少量炎性细胞浸润,B1和B2组细胞计数分别为15.70±3.83,16.70±4.17,两组间炎性细胞计数不存在统计学差异(P=0.583);4组大鼠脊髓组织均未见明显的脱髓鞘改变。
结论： EAE大鼠CSF中的IgG对其临床病情及组织病理学变化并无显著影响,发病时CSF中增高的IgG可能是炎性反应的标志或免疫反应的副产物,有待进一步研究。