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RegⅢγ作为新型肠道抗菌蛋白(Antibacterial protein,AMPs),是一种在小肠上皮中表达的可溶性凝集素,具有抗炎、抗菌、损伤修复和促进细胞增殖等多种生物学功能。RegⅢγ能迅速杀死或灭活微生物,是最古老的免疫防御机制之一,在肠道黏膜免疫中发挥着十分重要的作用,因此RegⅢγ为防治早期断奶仔猪腹泻具有很好的研究前景。但其表达调控的分子机制还需要进一步的研究。RegⅢγ的表达为诱导型的,依赖于细胞髓样分化初级应答蛋白(Myeloid differentiation primary response protein 88,MyD88)介导的信号通路,并且RegⅢγ杀菌活性对革兰氏阳性细菌(Gram positive bacteria,G~+)具有选择性。本课题用灭活的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)和其表面分子肽聚糖(Peptidoglycan,PG)诱导IPEC-JⅡ细胞,探究RegⅢγ蛋白表达调控的分子机理。方法与结果如下:1、不同浓度灭活S.aureus和PG诱导IPEC-JⅡ细胞24 h,观察灭活S.aureus和PG对细胞形态的影响,检测灭活S.aureus和PG对细胞活力的影响,结果显示,灭活S.aureus和PG对细胞作用效果相似,低浓度试验组细胞形态变化不明显,高浓度部分出现细胞拉长,透亮的现象。随着浓度的增加,灭活S.aureus和PG对细胞的活力的影响有加强的趋势,但差异不显著,后续试验浓度在此范围内选取。2、Western-blot和Q-PCR检测RegⅢγ蛋白的表达,结果显示灭活S.aureus和PG可以诱导RegⅢγ的表达。3、检测核因子kappa B(Nuclear factor kappa B,NF-κB)和丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路中p38 MAPK激酶(也称为应激激活蛋白激酶2)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)和细胞外信号调节激酶(Extracellular regulated protein kinases,ERK)等分子蛋白在灭活S.aureus和PG诱导时的表达变化。结果显示,与对照组相比,p65、p38、JNK和ERK蛋白特异性非磷酸化水平降低。综上,灭活S.aureus和PG可以诱导IPEC-JⅡ细胞表达RegⅢγ。RegⅢγ的表达需要活化MyD88下游的信号分子p65、p38、JNK和ERK,p65、p38、JNK和ERK蛋白非磷酸化水平降低,说明磷酸化水平增加,MyD88下游的NF-κB和MAPK信号通路被激活活化从而参与RegⅢγ蛋白的表达调控。