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幽门螺旋杆菌（Helicobacterpylori,Hp）感染是慢性胃炎和消化性溃疡的主要病因,与胃癌和胃粘膜相关淋巴组织（MALT）淋巴瘤的发生也密切相关。目前多种药物联合治疗根除Hp存在疗效欠理想、副反应高和Hp耐药菌株不断增加等问题,疫苗有望为防治Hp感染提供一种新的途径。细胞毒素相关蛋白（Cytotoxin—associated protein A,CagA）是Hp的主要毒力因子。常与Hp空泡毒素（VacA）伴随存在,具有强免疫原性和免疫保护性,是Hp疫苗的首选抗原之一。Hp尿素酶（Urease）作为Hp的定植因子和毒力因子,表达量高,序列高度保守,其中以B亚单位（UreB）抗原性和保护作用最强,是Hp免疫防治的主要候选疫苗之一。霍乱毒素B亚单位（CTB）是霍乱毒素的非毒性部分,有很强的免疫原性,作为免疫佐剂能增强抗原蛋白的免疫效力和免疫特异性。用植物作为生物反应器来生产重要的、有经济价值的药用蛋白是“分子农业”发展的新趋势。多方面的报道证明植物可以高水平表达具有功能的重组蛋白质。烟草是基因工程中最为广泛使用的模式植物之一,生长速度快,生长周期短,农杆菌介导的遗传转化体系完善,因此广泛应用于植物疫苗的基础研究和前期研究。番茄营养丰富,果实可直接生食,是研制植物口服疫苗的理想载体。 本研究分别构建了含融合基因CTB—cagA3.1、CTB-Linker-ureB和CTB-Linker-cagA1.8的植物表达载体,采用农杆菌介导的叶盘转化法,将融合基因转入烟草和番茄中,以期获得同时表达Hp CagA蛋白或UreB蛋白和粘膜佐剂CTB的转基因植株,为研制防治人类Hp感染的有效和安全的功能性食品奠定基础。同时优化番茄的转化体系,为建立以烟草和番茄作为生物反应器来表达微生物抗原奠定了技术平台。 通过两年多的实验,获得了以下结果:（1） 构建能在烟草和番茄基因组中高效表达的含外源融合基因的植物表达载体p13-CC1N、 p23—35SCLUN、p23-35SCLCN和p121-CLUN,由CaMV 35S启动子启动,PCR分析、 酶切鉴定及DNA序列测定验证结果正确后将质粒导入农杆菌EHA105或GV3101中。（2） 构建原核表达载体pET28a-CLU,转入大肠杆菌BL-2l（DE3）中,ITPG诱导表达, 以检测融合蛋白的原核表达情况;（3） 利用农杆菌介导的遗传转化系统将融合基因导入烟草和番茄基因组中,经过抗性筛选、 分化和生根培养获得了转基因烟草和番茄植株。转化后烟草叶片抗性芽分化率可高达 100%,优化条件后番茄抗性芽分化率达40%～60%。（4）PCR验证目的基因已整合到烟草和番茄基因组中,PCR阳性率为80%～93.7%。 Western-blot检测目的蛋白在转基因植株的含量及表达情况,此实验仍在进行中。