人BAF53多克隆抗体的制备与活性分析

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抗体是免疫细胞化学技术的首要试剂,制备具有高特异性和敏感性的高效价抗体在细胞生物学研究方面具有重要意义。目前国内外市场各种特异性抗体日益增多,许多实验室都直接应用市售产品。但目前我国自制抗体的种类很少,发展抗体生产十分必要。尤其是研究一种新的蛋白质分子,能够自制抗体显得尤为重要。hBAF53是近年来在一个染色质改构复合物human SWI/SNF复合物中新发现的亚基。 为了获得hBAF53的多克隆抗体,本实验采用基因工程的方法制备抗原。我们用PCR方法从含有BAF53全长cDNA的质粒中扩增BAF53部分序列,用酶切后的ΔBAF53 cDNA片段构建表达质粒,用重组的表达质粒转化大肠杆菌,经IPTG诱导表达,再经包涵体裂解、纯化,得到纯度和含量都符合用于免疫需要的hBAF53抗原多肽。用获得的抗原免疫实验动物,首次免疫添加等体积的弗氏完全佐剂,以增强抗原的免疫原性。经两次加强免疫之后,获得实验动物抗血清。用纯化的抗原蛋白,经斑点印迹试验测得BAF53抗血清的效价,又用提取的Hela细胞核蛋白(含有天然BAF53蛋白)进行免疫印迹分析(western blotting),证明天然BAF53蛋白也是该抗血清的抗原,说明获得的多抗血清具有高特异性和敏感性,可用于多方面的研究。
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