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目的：1.比较孕激素联合人绒毛膜促性腺激素法与脱氢表雄酮法制作SD幼年雌性大鼠PCOS动物模型的差异,评价两种方法应用效果,为后续研究提供适宜的动物模型。2.分析抗苗勒管素、胰岛素及其他相关影响因子在PCOS大鼠卵泡生长发育的作用、变化及可能作用机制。3.探讨PCOS大鼠血清、卵巢局部及单卵泡中抗苗勒管素与胰岛素抵抗水平间的相关性,为临床诊疗PCOS提供新思路。4.分析胰岛素受体在抗苗勒管素与胰岛素抵抗水平相关性中的作用,进一步探讨二者间相互作用的机制。方法：1.两种方法制作PCOS大鼠动物模型：选择标准养殖的幼年SD雌性大鼠共120只,随机分成两组,采用孕激素联合人绒毛膜促性腺激素(hCG)法和脱氢表雄酮(DHEA)法分别制作大鼠PCOS病理模型,通过阴道脱落细胞涂片、血清激素水平、卵巢组织病理变化等指标评价所制作模型的效果。2.血清相关指标检测与分析：解剖大鼠,采用腹主动脉取血方法采集血液并分离血清,放射免疫法(RIA)测定各组大鼠血清黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)；全自动微粒子化学发光免疫分析仪检测血清雌二醇(E2)、孕酮(P)及睾酮(T); ELISA法测定血清抗苗勒管素(AMH)和胰岛素(INS)值。3.卵巢组织病理学检查：解剖、分离、固定保存各组大鼠卵巢组织,按病理切片技术常规进行石蜡包埋、切片、HE染色,普通光学显微镜下观察其病理学改变。4.卵泡计数及相关影响因子分析：大鼠卵巢组织全部切片,每例卵巢选取5张切片,每张切片随机选择5个视野,计数每个视野内各级卵泡数。与血清E2、T、LH、FSH及LH/FSH值、AMH、FINS、FPG及HOMA-IR行相关性分析,筛选变量后行回归分析。5.血清AMH和胰岛素抵抗水平的相关性分析：计算HOMA-IR,据其水平将大鼠分为PCOS无IR组(n=10)、PCOS合并IR组(n=10)、对照组(n=10),行三组间比较和相关性分析。6.卵巢AMH和胰岛素受体(Ir)的表达分析：免疫组织化学方法检测各组大鼠AMH和Ir的表达,并进行图像分析,计算阳性单位(PU值)行半定量比较和相关性分析。结果：1.实验组Ⅰ(孕激素联合hCG法)和实验组Ⅱ(DHEA法)大鼠失去规律动情周期的比例分别为86.4%和77.3%；实验组Ⅰ表现为肥胖(P<0.05),实验组Ⅱ体重显著低于对照组(P<0.05)；实验组Ⅰ中E2较对照组低(P<0.05),实验组Ⅱ则高于对照组(P<0.05)；实验组Ⅱ的LH与对照组无差异；实验组Ⅰ的LH、LH/FSH比值均高于对照组(P<0.05)。两实验组大鼠血清T、FINS、FPG和HOMA-IR均高于对照组(P<0.05)；两实验组大鼠卵巢病理均可见多个扩张的囊泡,颗粒细胞层数减少,卵泡膜细胞、间质细胞增生。2.实验组Ⅰ中,初级卵泡、窦前卵泡及窦状卵泡数目较对照组明显增多(P<0.05),原始卵泡数量与对照组无明显差异(P=0.343),总卵泡计数是正常对照组卵泡数的2-3倍。PCOS组增多的卵泡与血清睾酮及AMH成正相关,Pearson相关系数为分别为0.538和0.637(P<0.05)。多元线性回归方程为PCOS卵泡数=107.182+33.067T+0.412AMH。但二者对血清AMH的影响作用相当,均较差。3.实验组Ⅰ血清AMH均高于对照组(P<0.05),呈正相关(r=0.691,P=0.001)；多元回归分析示T被剔除,AMH与HOMA-IR、FINS之间有正直线关系(F=12.362,P=0.000),方程为：血清AMH=15.776HOMA-IR+4.751 FINS-74.027,但二者对血清抗AMH的影响作用相当,均较差。4.卵巢组织免疫组化示,AMH主要表达于窦前卵泡和小窦状卵泡的颗粒细胞。单卵泡AMH水平在三组间无明显统计学差异(x2=0.657,P=0.720)。卵巢局部AMH水平与AMH(+)的卵泡数目在三组间存在显著差异(F=15.241,P=0.000),AMH表达强度与AMH(+)卵泡数目呈正相关。5.卵巢组织免疫组化显示,胰岛素受体(Ir)于卵泡膜细胞、颗粒细胞和间质细胞均广泛表达,血管内皮细胞表达更为丰富。实验组与对照组比较、PCOS无IR组和PCOS合并IR组与对照组间比较,Ir表达强度均无统计学差异(P>0.05)；卵巢局部AMH与Ir表达强度无明显相关性(r=0.000,P>0.05)；单卵泡AMH、Ir均无统计学差异(P>0.05),无明显相关性(r=0.011,P>0.05)。结论：1.孕激素联合hCG法制作PCOS大鼠模型效果优于DHEA法,适合本研究。2.可能存在这样的作用通路：升高的胰岛素刺激雄激素合成增多,雄激素在卵巢局部导致生长卵泡数目增多,增多的生长卵泡合成过量的AMH, AMH可能一方面抑制了原始卵泡的募集,另一方面则导致卵泡发育停滞。3. PCOS大鼠单卵泡AMH分泌量尚正常,实验组升高的AMH是由AMH表达(+)的小卵泡数目增加导致的,胰岛素抵抗程度越高,小卵泡越多,AMH也越多。4. PCOS产生胰岛素抵抗的原因可能发生在受体功能或结构异常及受体后的其他方面,与受体数目无关。胰岛素受体参与了PCOS卵巢间质纤维化和新生血管生成的调节,参与PCOS的发生及发展。111