论文部分内容阅读
本论文研究了黄姜中自身酶水解黄姜薯蓣总皂苷得到的薯蓣皂苷元的提取；微生物Absidia sp.s00菌所产的黄姜薯蓣皂苷酶水解黄姜薯蓣总皂苷得到的薯蓣皂苷元的提取,及微生物Absidia sp.s00菌所产的黄姜薯蓣皂苷酶的分离、提纯及酶性质的研究。将黄姜在25℃C条件下分别保存15d和30d,利用其自身酶将黄姜中薯蓣皂苷部分转化为薯蓣蓣皂苷元,并提取薯蓣皂苷元。经比较25℃放置30d的黄姜为原料,苷元得率较高。500g25℃放置30d的黄姜经70%乙醇浸泡得到薯蓣总皂苷24.7g,总皂苷得率为4.94%。采用AB-8大孔吸附树脂分离纯化薯蓣皂苷元,95%乙醇洗得薯蓣皂昔元11.7g,薯蓣皂苷元得率为2.34%。利用D-280大孔吸附树脂脱色,最终得到薯蓣皂苷元10.2g,其得率为2.04%。经高效液相色谱检测其纯度为91%。为了得到高产黄姜薯蓣皂苷酶的菌,从七种微生物中筛选出Absidia sp.s00菌作为研究对象。该菌产酶能水解黄姜薯蓣皂苷的3位碳糖基,制备薯蓣皂苷元。粗酶液利用DEAE-Cellulose DE52阴离子交换柱进行梯度洗脱得到提纯酶。采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳对其进行纯度检测及蛋白分子量测定,测得其分子量为56kDa。提纯酶的性质研究结果如下：最佳底物浓度为：0.2%；最佳反应温度为40℃；最佳反应时间为30h；最佳反应pH值为5；酶温度稳定的范围为20℃-40℃；酶的pH值稳定范围为2.2-6.0；金属离子K+、Na+对酶反应影响不大,而Mg2+、Ca2+、Cu2+、Fe3+都不同程度地对酶有抑制作用。以1g浓度为10g/L的黄姜薯蓣皂苷作为底物,在最佳反应条件下进行酶反应,用石油醚萃取薯蓣皂苷元,浓缩后自然结晶,得到薯蓣皂苷元0.1g,得率为10%。最后使用高效液相色谱检测产物薯蓣皂苷元纯度为90%以上。