先天免疫系统是宿主抵御病原微生物入侵的第一道防线,STING作为哺乳动物抗病毒先天免疫应答中的关键介导者,被环二核苷酸c GAMP诱导聚合并招募下游信号分子TAK1、IRF3等来共同调控抗病毒因子的产生,STING的分子作用机制一直以来都是免疫学研究的热点。与之相比,昆虫STING虽然在功能上与哺乳动物STING相似,通过激活NF-κB转录因子Relish来介导抗病毒或抗菌先天免疫应答,然而昆虫STING是如何被激活的以及通过何种方式介导Relish的活化仍然不清楚。为了探究果蝇STING（Drosophila STING,dSTING）是如何激活Relish并介导抗病毒免疫应答,本研究对dSTING进行了氨基酸序列分析、Native-PAGE检测、荧光共聚焦显微镜观察以及硫黄素T（Th T）结合分析,鉴定了dSTING依赖RHIM基序形成类淀粉样蛋白纤维聚合物;通过病毒感染果蝇S2细胞,检测下游抗病毒因子的诱导水平以及病毒的复制水平,证实了dSTING聚合物的形成是其介导抗病毒免疫应答、抑制病毒复制所必需的;免疫共沉淀、荧光共定位进一步解析了dSTING通过与IMD相互作用来激活Relish的作用机制。主要研究结果如下:1.dSTING通过形成类淀粉样蛋白纤维聚合物而激活通过同源序列比对,鉴定到dSTING存在两个同源性较高的RHIM类似基序,分别命名为RHIM1和RHIM2,而人STING与家蚕STING也各包含一个假定RHIM基序。构建dSTING-WT、dSTING-ΔRHIM1/2删除突变体的稳转细胞系并进行Native-PAGE检测,结果表明,dSTING-WT和dSTING-ΔRHIM2均能自我聚集形成四聚体、八聚体、十六聚体、三十二聚体等多聚物,而dSTING-ΔRHIM1形成的聚合物则显著减少。共聚焦显微镜观察dSTING-m Cherry在细胞内的分布,同样表明了dSTING通过RHIM1基序在核周聚集形成聚合物,且该聚合物在c GAMP的诱导下聚合能力进一步增强,部分形成点状聚集。Th T是类淀粉样蛋白纤维聚合物的特异性荧光染料,而Th T染色结果表明,dSTING形成的聚合物与Th T特异性结合,且c GAMP诱导该聚合物的Th T荧光进一步增强。对dSTING调控的抗病毒信号通路下游的抗病毒因子的诱导水平进行q PCR检测,结果表明,dSTING-WT和dSTING-ΔRHIM2均能诱导抗病毒因子产生,而dSTING-ΔRHIM1则失去了诱导能力。并且,表达dSTING-WT或dSTING-ΔRHIM2的细胞内DCV、Cr PV病毒复制水平显著低于表达dSTING-ΔRHIM1的细胞。以上研究结果证实了,在受到免疫刺激时,dSTING通过RHIM1基序形成聚合物而激活并介导昆虫的抗病毒先天免疫应答。2.dSTING通过与IMD相互作用调控抗病毒免疫应答IMD是IMD信号通路中位于Relish上游的信号分子,且包含c RHIM（Cryptic RHIM）基序。通过免疫共沉淀检测HA-dSTING与Myc-IMD的相互作用,结果表明,在DCV病毒感染条件下,IMD存在于dSTING的免疫沉淀物中。通过共聚焦显微镜观察dSTING-m Cherry与IMD-EGFP的荧光共定位,结果表明,在没有c GAMP存在时,dSTING与IMD各自发生聚合,分别位于细胞质的不同区域;而添加c GAMP刺激后,部分dSTING与IMD则共定位于核周。而对dSTING与IMD的RHIM删除突变体的免疫共沉淀检测结果表明,当dSTING的RHIM或IMD的c RHIM基序删除后,两种蛋白不再具有相互作用。以上研究结果证实了,dSTING通过RHIM基序与IMD相互作用并招募其它相关分子以形成免疫复合物来激活Relish并调控抗病毒先天免疫应答的作用机制。