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目的:
化疗是胶质瘤重要的辅助治疗手段,但常规的化疗疗效较差,耐药现象的存在是胶质瘤化疗效果不佳的重要原因。本研究采用MTT法进行体外药敏试验检测脑胶质瘤细胞对化疗药物的敏感性,同时检测胶质瘤组织中耐药基因的表达情况,探讨两者对胶质瘤化疗的指导意义。
方法:
用免疫组织化学法检测60例胶质瘤中耐药基因:P-糖蛋白(P-170)、谷胱苷肽-S-转移酶π(GST-π)、O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶(MGMT)、DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)及EGFR基因的表达。同时采用MTT法检测48例脑胶质瘤对八种化疗药物及联合用药:尼莫司汀(ACNU)、卡氮芥(BCNU)、长春新碱(VCR)、替尼泊甙(VM-26)、替莫唑胺(TMZ)、福莫司汀(Fotemustine)、顺铂(CDDP)、泰素(Tal)、ACNU+CDDP、VM-26+CDDP和ACNU+VM-26的体外敏感性。并选择以耐药基因和药敏试验为指导的化疗患者为试验组(n=35),选择与试验组相匹配的传统的常规化疗患者为对照组(n=40),评价两组病人近期的疗效和生存情况。
结果:
1.各耐药基因及EGFR在胶质瘤中的表达情况及其相关性:60例胶质瘤病人中MGMT、P-170、GST-π、TopoⅡ和EGFR的阳性表达率分别为63.3％、68.3％、58.3％、40.4％和61.7％。MGMT的表达与GST-π、TopoⅡ以及EGFR的表达呈正相关,P-170与GST-π的表达水平呈正相关。其中,MGMT、EGFR和TbpoⅡ的表达随胶质瘤的恶性程度增高阳性表达率明显增高(P＜0.05)。
2.MTT法体外药敏试验检测胶质瘤细胞对化疗药物敏感性:48例胶质瘤细胞对八种化疗药物以及三组联合用药的敏感性从高到低依次为:VM-26+DDP(90.0％)＞ACNU+VM-26(80.0％)＞ACNU+DDP(60.0％)＞VM-26(50.0％)＞Thxol(43.5％)＞ACNU(4113％)＞DDP(34.8％)＞BCNU(30.4％)＞TMZ(21.7％)＞VCR(17.4％)＞Fotemustine(13.0％)。联合用药对胶质瘤细胞的抑制率明显优于单药,而胶质瘤的病理级别及初、复发对体外药物敏感性无影响。
3.化疗药物体外抑制率与耐药基因表达水平之间的关系:Spearman等级相关分析发现:MGMT的表达水平与ACNU(r=-0.44.1,P＜0.05)以及TMZ(r=-0.539,P＜0.05)的体外抑制率呈负相关,P-170的表达水平与VCR的体外抑制率呈负相关(r=-0.465,P＜0.05),GST-π的表达水平与DDP的体外抑制率呈负相关(r=-0.355,P＜0.05)。
4.试验组和对照组的近期疗效和生存情况分析:低级别胶质瘤中,试验组的疾病客观有效率(objective response,OR)和疾病控制率(response rate,RR)分别是20.0％和86.7％;对照组的OR和RR分别是11.8％和76.5％,两组间差异无统计学意义;试验组和对照组的中位无进展生存期(progressive-free survival,PFS)分别是15.8个月(95％CI13.1～18.5)和12.7个月(95％CI9.7～15.7);中位生存时间(overall survival,OS)分别是19.1个月(95％CI15.8～22.4)和15.1个月(95％CI12.4～17.7),两者之间差异无统计学意义。在高级别胶质瘤中,试验组的OR和RR分别是15.0％和55.0％;对照组的OR和RR分别是8.7％和34.8％,两组间差异有统计学意义(P＜0.05);试验组和对照组中位PFS分别是11.7个月(95％CI8.9～14.5)和7.9个月(95％CI6.1～9.9);中位OS分别是16.2个月(95％CI13.1～19.3)和12.1个月(95％CI9.6～14.0),两组间差异有统计学意义(P＜0.05)。
结论:
1.在胶质瘤细胞中MGMT、P-170、GST-x、TopoⅡ和EGFR的阳性表达均高于正常脑组织,表明多数胶质瘤中存在多药耐药现象,通过耐药基因的检测可以获得每个胶质瘤患者对各种化疗药物的耐药情况。
2.MTT比色法体外药敏试验作为胶质瘤体外药敏试验的一种,可用于胶质瘤患者的个体化化疗的药物筛选。
3.胶质瘤体外药敏试验结合耐药相关基因的检测,对于胶质瘤的个体化化疗方案的制定以及临床化疗疗效的预测等具有重要的意义。