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茯砖茶是一种非常重要的砖茶,深受西北少数民族地区居民的欢迎。在茯砖茶成品的茶叶表面普遍存在俗称“金花”的金黄色小点,这是茯砖茶区别于其它砖茶的重要特征。“金花”是由一类俗称“金花菌”的真菌在茯砖茶中生长而产生的,“金花”的多少是茯砖茶品质好坏的重要指标。关于“金花菌”的分类地位,目前还没有定论。本研究从湖南、四川和湖北的茶厂收集了28份砖茶样品进行微生物分离,根据形态学特征和酯酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,对其中的“金花菌”分离菌株进行了分类鉴定,并研究了“金花菌”对茯砖茶品质的影响。 首先,本研究以不同的砖茶成品、不同制作阶段的茶样和制茶原料为材料,采用不同方法分离“金花菌”。结果表明,茯砖茶成品中均存在大量“金花菌”;在茯砖茶制茶原料以及部分康砖、金尖及青砖茶成品中都能分离到一定量的“金花菌”。从同一块茯砖茶分离“金花菌”时,得到了4类菌落形态不同的“金花菌”,说明茯砖茶中“金花菌”的菌落形态具有多样性。 第二,本研究以分离自不同砖茶及茶样中的17株“金花菌”菌株和5株模式菌株及一株冠突散囊菌(Eurotium cristatum)为材料,调查了培养基、温度、培养基pH值、培养基中的NaCl浓度及蔗糖浓度对供试菌株生长的影响。结果表明,供试菌株在PDA、CZG培养基上,25~35℃,偏酸性条件下生长良好,其中13株分离菌株在普通条件下均进行有性生殖,产生闭囊壳等结构;在40℃条件下培养时或CZG培养基中NaCl浓度达14%或蔗糖浓度达60%时开始进行无性繁殖,产生分生孢子等结构。根据菌株的菌落形态和生长特性,17株分离菌株中的12株与冠突散囊菌非常相近,另5株分离菌株则差异较大,由此说明砖茶中的“金花菌”具有多样性。根据供试菌株的生长特性和菌落形态等,本研究将17株“金花菌”分离菌株分为6个类群。 第三,本研究一方面在形态学基础上对17株“金花菌”分离菌株进行鉴定:在光学显微镜下观察其闭囊壳、子囊、子囊孢子和分生孢子等的形态并测量其大小,并在扫描电镜下观察部分菌株的子囊孢子形态。另一方面在生化水平上对菌株进行鉴定:以这些供试菌株为材料进行其酯酶同工酶聚丙烯酰胺凝胶电泳和可溶性蛋白的SDS-PAGE。根据菌株的形态学特征和酯酶同工酶电泳图谱,17株分离菌株归为散囊菌属的两个种,15株为冠突散囊菌(E. cristatum);其余2株为谢瓦氏散囊菌(E. chevalieri)。本研究说明茯砖茶中的“金花菌”是由散囊菌属的不同种组成的,其中扶砖茶“金花菌”的分类鉴定及共对扶砖茶品质的形响冠突散囊菌为优势种。同时说明醋酶同工酶电泳可以在种的水平上进行散囊菌属真菌的鉴定。 第四,为了解“金花菌”对筱砖茶的品质风味是否起重要作用,本研究主要以获砖原料为材料,将“金花菌”分离菌株接种到获砖原料后经过80℃高温处理2h,并以获砖原料和经过高温处理的原料为对照。将原料分别进行以下不同处理:接种不同 “金花菌”菌林、不同接种量和接种后不同加水量。然后测定不同处理茶样的生化成分,并选择其中4个茶样进行香气成分的分析.结果发现,获砖原料接种“金花菌”菌株并“发花”后,茶样的水浸出物、茶多酚和氨基酸含量均明显下降;咖啡碱含量基本未变;香气物质总量减少,而保留时间为前20min内的香气物质总量增多,其中芳樟醇及其氧化物的含量明显增加;接种“金花菌”后未“发花”的获砖茶样的香气物质种类和数量均比对照原料少。“发花”使获砖茶具有特殊的“菌花香”,这种变化是由“金花菌”的繁殖引起的。本研究同时在金尖原料和青砖原料中接种“金花菌”后发现,其中的生化成分变化趋势与上述获砖原料生化成分的变化趋势一致。本研究说明“金花菌”能影响筱砖茶的生化成分和香气成分,从而达到改善获砖茶品质和风味的目的。 第五,为了解不同砖茶及茶样中的微生物组成,本研究以不同的砖茶成品、不同制作阶段的茶样和制茶原料为材料,采用不同方法进行微生物的分离。结果在各个茶样中基本都可分离得到细菌、真菌及其它微生物.说明砖茶及其它茶样中微生物种类具有多样性。 最后,为了解在砖茶中繁殖的“金花菌”对其它微生物的影响,本研究选择部分 “金花菌”菌株,分离自砖茶的部分真菌及其它来源的细菌、酵母菌和放线菌菌株为材料,将“金花菌”与这些微生物进行对峙培养,调查拮杭作用的有无。结果发现,部分供试的“金花菌”对部分真菌、细菌和酵母菌的生长具有不同程度的抑制作用;对放线菌贝J无抑制作用;同时“金花菌”的生长也受部分真菌的影响。以上结果表明, “金花菌”在砖茶中的繁殖可能对其它微生物的生存和繁殖有一定的抑制作用,其它微生物也有可能对“金花菌”的生长起抑制作用。 本研究为我国获砖茶中“金花菌”分类地位的确立、“金花菌”对获砖茶品质风味的影响及“金花菌”为获砖茶中优势菌群的观点提供了有力的证据。同时发现康砖和青砖等砖茶中也含有“金花菌”,且与获砖茶中“金花菌”的生物学特性十分相似。关键词:获砖茶;“金花菌,’;生长特性;分类;风味品质