芽孢杆菌SMrs28和伪弯头曲霉Ds03次级代谢产物及线虫触杀活性研究

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微生物次生代谢产物结构新颖、种类繁多,是活性先导化合物的重要来源之一。本论文以论文作者所在实验室从瑞香狼毒根际土壤分离、鉴定并筛选获得的线虫触杀活性菌株芽孢杆菌SMrs28和伪弯头曲霉Ds03为研究对象,开展了其次生代谢产物的化学成分研究,以期发现结构新颖的微生物源活性化合物。  论文首先采用单因素法对菌株SMrs28的摇瓶发酵条件进行了优化,以发酵液的OD600值为指标,得出菌量最多的发酵条件:发酵培养基的最优碳源和氮源分别为葡萄糖和酵母粉,发酵时间48 h,接种量10%,温度28℃,转速180 r/min,装液量75 mL/150 mL,初始pH7.2。通过静态吸附法,以吸附残液和解吸液对线虫的触杀活性为指标,对大孔吸附树脂型号进行了筛选,其中D101型大孔树脂对发酵液中的活性成分的吸附和解吸效果优于XAD-4、HP20和AB-8。  运用硅胶、葡聚糖凝胶柱层析等色谱分离方法,从Bacillus sp.SMrs28的发酵液中分离得到六个化合物,通过UV、IR、MS及1D、2D NMR等波谱学数据分析及文献比对,确定其化学结构分别为:4-氧杂二环[3.2.2]壬-1(7),5,8-三烯(1),(3S,8aS)-六氢-3-甲基吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮(2),苯乙酰胺(3),环(L-脯-L-缬)二肽(4),月桂酸(5),反式油酸甲酯(6),以上化合物均为首次从该菌株代谢物中分离得到,其中(1)为一新骨架化合物;采用相同分离纯化与结构鉴定方法,从曲霉Aspergillus pseudodeflectus Ds03的发酵液中分离鉴定了三个化合物,其化学结构鉴定为:辛辣木-8-烯-6β,7α,11-三醇(7),正二十六-5,8,11-三烯酸(8),十七烷酸乙酯(9),以上三种化合物均为首次从该菌株分离得到。  采用直接触杀法对部分分离鉴定化合物的线虫触杀活性进行了评价,其中化合物3在800μg/mL处理72 h后对五种受试线虫表现出较强的触杀活性,化合物1和其它化合物显示弱活性。本文通过对两种植物基微生物代谢物研究,发现了新结构及线虫触杀活性化合物,为微生物资源的深层开发利用奠定了基础。
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