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骨肉瘤是多发于青少年的富含血管的高度恶性肿瘤,其生长很大程度上依赖于血管的供应。目前疗效不佳,其中重要原因是瘤内存在伴发性肿瘤抵抗,而伴发性肿瘤抵抗和肿瘤血管生成特性相关。抗肿瘤血管生成治疗耐药性的获得可能与多种低氧反应性基因有关。DNA 损伤修复基因脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶APE1 具有核酸内切酶及氧化还原双功能,系低氧诱导细胞凋亡的重要保护基因,推测与抗肿瘤血管生成的耐药性有关。RNA 干扰(RNAi)技术阻断基因表达具有高稳定、高效率和高特异的特点,完全有可能作为一种新的分子生物学工具成为肿瘤基因治疗的新手段。通过RNAi 技术抑制肿瘤DNA 损伤修复基因APE1 表达,增加肿瘤细胞抗血管生成敏感性,有效清除肿瘤细胞,是肿瘤基因治疗的一项重要策略。本项目应用免疫组化检测骨肉瘤中APE1 表达,分析APE1 与骨肉瘤演进以及血管生成的关系。并应用RNA 干扰技术,构建人体APE1 siRNA 表达载体pSilence APE1,“敲除”骨肉瘤细胞APE1 基因的表达。通过裸鼠荷瘤实验,荷瘤生长曲线观察、蛋白印迹和免疫组化等技术,探讨APE1“敲除”骨肉瘤细胞对抗血管生成治疗的反应。研究目的1、探讨DNA 损伤修复基因APE1 在骨肉瘤中的表达及其与肿瘤演进、血管生成及患者预后的关系。2、构建骨肉瘤APE1 siRNA 表达载体pSilence APE1,并检测其对HOS 和9901骨肉瘤细胞APE1 蛋白表达的敲除作用,同时探讨其在抑制内皮细胞迁移过程中的作用。3、通过肿瘤生长、病理组织学、免疫组化以及激光共聚焦等技术,观察pSilenced APE1 对ES 抗裸鼠骨肉瘤移植瘤血管生成协同作用。研究内容和方法1、APE1 蛋白在骨肉瘤细胞中的表达及其与血管生成的关系。免疫组化SP 法检测五种骨肉瘤细胞株(HOS、U-2OS、Sa-OS-2、9901、9706)、10 例正常骨、10 例良性骨瘤和60 例骨肉瘤组织中APE1 蛋白表达,并根据CD34 和F