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[目的]研究无血清培养HT-29结肠癌干细胞生物学行为；在此基础上研究马齿苋提取物干预该细胞系以及HT-29干细细胞的体外增殖能力及与肿瘤干细胞自我更新密切相关的Wnt及Notch信号转导通路中的信号物质的表达等相关生物学行为。[方法]利用水和乙醇提取马齿苋后,用紫外可见分光光度仪检测提取物中黄酮类化合物的含量。体外培养结直肠癌细胞株(LoVo cells. SW480 cells、HCT-116 cells、HCT-8 cells),采用不同浓度的马齿苋提取物对其进行干预,CCK-8法检测洋葱水提取物和乙醇提取物对结直肠癌细胞株增殖的抑制作用。对结肠癌HT-29细胞进行无血清培养,以流式细胞仪检测结肠癌HT-29干细胞CD133和CD44表达,以5-FU处理结肠癌干细胞并观察其增殖抑制,对结肠癌干细胞进行动物实验以确定其成痛特征；用CCK-8法分别测定不同浓度马齿苋乙醇提取物对HT-29细胞及HT-29干细胞的生长抑制情况；用流式细胞仪检测马齿苋乙醇提取物对HT-29细胞凋亡情况；用Western blot以及RT-PCR法分析马齿苋乙醇提取物对HT-29细胞B-catenin. Notch1及Notch2基因表达的影响,对B-catenin、Notch1及Notch2蛋白表达的影响。[结果]马齿苋水提取物中黄酮类化合物含量与乙醇提取物相比,无显著差异(p<0.05)。CCK-8法检测马齿苋水提取物和乙醇提取物对结直肠癌细胞株的抑制作用具有剂量和时间依赖性,且乙醇提取物较水提取物对结直肠癌细胞株增殖抑制更显著。通过无血清方法培养后,HT-29细胞中CD133及CD44阳性表达比例明显升高,且CD133及CD44阳性HT-29细胞对5-FU有明显耐药作用,体外增殖活性明显增强；CCK-8法检测HT-29细胞及HT-29干细胞增殖发现,马齿苋乙醇提取物能明显抑制HT-29细胞及HT-29干细胞增殖,且剂量与细胞增殖抑制率呈正相关,HT-29细胞的抑制作用较HT-29干细胞显著(p<0.05)；流式细胞仪检测马齿苋提取物能增强HT-29细胞及HT-29干细胞的凋亡率,HT-29细胞的凋亡率较HT-29干细胞显著(p<0.05)；实时荧光定量PCR检测马齿苋提取物能下调HT-29干细胞中B-catenin、Notch1基因表达,较HT-29细胞相比,均有统计学意义(p<0.05),马齿苋提取物能上调Notch2基因的表达,与HT-29细胞相比,无统计学差异(p<0.05)；Western blot马齿苋提取物能下调HT-29干细胞中B-catenin、Notch1及Notch2蛋白表达,较HT-29细胞相比,均有统计学意义(p<0.05)。[结论]马齿苋水提取物和乙醇提取物对体外培养的结直肠癌细胞株的增殖有明显抑制作用。在结肠癌细胞株存在结肠癌干细胞,通过无血清培养能分离出具有干细胞特征的结肠癌干细胞株；马齿苋乙醇提取物对体外培养的HT-29细胞及HT-29干细胞的增殖有明显抑制作用,其作用机制与诱导凋亡和影响细胞周期,下调β-catenin、Notchl基因表达,上调Notchl基因表达,下调β-catenin、Notchl及Notch2蛋白的表达。