“甘草附子汤”出自张仲景的《伤寒论》,由炮附子(黑顺片)、炙甘草、白术和桂枝四味中药组成。具有祛风除湿、温经散寒、温阳补中的功效,临床用于治疗风湿寒痹。本文以“甘草附子汤”中黑顺片单方、黑顺片药对和全方中生物碱组分以及生物碱与黄酮、皂苷组分配伍为研究对象,进行药效学及代谢组学的研究,确定方剂中起药效作用的药物和化学组分以及分析方中化学组分治疗风湿病的作用机理。以期为“甘草附子汤”的临床应用提供理论及实验依据。1.“甘草附子汤”镇痛作用的药效学研究本文应用热板实验和醋酸扭体实验,来研究药物的镇痛作用。结果表明,黑顺片有显著的抑制疼痛的作用;黑顺片与“甘草附子汤”中其他药物配伍时,甘草、桂枝和白术均能不同程度增强其镇痛作用,且甘草的效果最强;方中生物碱组分与黄酮、皂苷组分配伍时,黄酮组分可显著增强生物碱组分的镇痛作用。推测,“甘草附子汤”方中起镇痛作用的药物主要是黑顺片和甘草,化学组分主要是生物碱和黄酮组分。2.“甘草附子汤”抗炎作用的药效学研究应用角叉菜胶致小鼠足肿胀模型(急性炎症模型)、大鼠佐剂型关节炎模型(慢性炎症模型)实验来研究药物的抗炎作用。结果表明,“甘草附子汤”中黑顺片和生物碱组分急性抗炎效果比慢性抗炎效果好;黑顺片与甘草配伍急性抗炎效果和慢性抗炎效果均较好;黑顺片与白术、桂枝配伍急性抗炎效果好。生物碱组分分别与黄酮、皂苷组分配伍给药,急性抗炎效果和慢性抗炎效果均增强;生物碱组分与黄酮组分配伍急性抗炎效果好;生物碱组分与皂苷组分配伍慢性抗炎效果好;生物碱组分、黄酮组分和皂苷组分三者配伍急性抗炎和慢性抗炎效果均最好。推测,“甘草附子汤”方中起抗炎作用的药物主要是甘草,化学组分主要是皂苷组分和黄酮组分。3.“甘草附子汤”免疫作用的药效学研究测定药物对RAW264.7细胞IL-1、IL-2和TNF-α三种因子分泌水平的影响来研究免疫作用。结果表明,“甘草附子汤”中黑顺片具有良好的免疫抑制作用,黑顺片与白术配伍免疫抑制作用减弱,黑顺片与甘草、桂枝配伍免疫抑制作用增强。生物碱组分具有较强的免疫抑制作用,生物碱组分与黄酮组分配伍免疫抑制作用增强,生物碱组分与皂苷组分配物免疫抑制作用下降。推测“甘草附子汤”中黑顺片、甘草、桂枝具有免疫抑制作用,白术具有免疫增强作用;生物碱组分、黄酮组分具有免疫抑制作用,皂苷组分具有免疫增强作用。4.“甘草附子汤”对佐剂型关节炎模型治疗作用代谢组学的研究使用代谢组学的方法,采用UPLC-Q-TOF-MS结合主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)的分析手段,对相关药物治疗佐剂型关节炎的生物标志物进行了研究。共鉴定出26个药物影响佐剂型关节炎模型相关的内源性代谢物。包括犬尿喹啉酸、黄尿酸、4-吡哆酸、柠檬酸、苯丙氨酸、肌酐等。这些生物标志物处于色氨酸代谢、苯丙氨酸代谢、亚牛磺酸和牛磺酸代谢、TCA循环和维生素B6代谢等代谢通路。给药后这些生物标志物的变化,表明“甘草附子汤”中生物碱组分、黄酮组分和皂苷组分治疗佐剂型关节炎,主要是通过调节氨基酸代谢、能量代谢和肠内菌群代谢发挥治疗作用。