研究背景：在过去几十年,在美国和其他国家,胃癌的发病率和死亡率有急剧下降。然而,胃癌作为第四大最常见的癌症仍是一个世界性的公共健康问题,其死亡率为癌症中的第二位。T-钙粘蛋白,亦称H-钙粘蛋白或钙粘蛋白-13或CDH13,属于非经典钙粘蛋白。T-cadherin是一个独特的钙粘蛋白细胞粘附分子,它缺失经典钙粘蛋白分子所具有的跨膜区以及胞浆区而经糖基磷脂酰肌醇(Glycosylphosphatidylinositol, GPI)附着于细胞膜上。T-cadherin首先在鸡胚脑组织中被发现,随后克隆了人类T-cadherin。T-cadherin基因定位于人染色体16q24长臂,多种肿瘤在此区域常发生等位基因的丢失。在大多数人类肿瘤细胞株和组织中T-cadherin基因和蛋白的表达是下调的。肿瘤中的T-cadherin下调至少有三个分子机制：(1)删除含有的T-cadherin基因的16q24位点；(2)启动子异常甲基化；(3)组蛋白修饰。在过去十年中,大量的证据显示T-cadherin不仅在乳腺癌同时在各种其他癌症和癌症细胞株如肝癌、结直肠癌、肺癌、卵巢癌、宫颈癌、乳腺癌、皮肤鳞癌、胃癌等中表达均有不同程度的减少。T-cadherin在许多不同种类的肿瘤中发生沉默,表示它可能作为一个抑癌基因而发挥作用。此外,T-cadherin重新表达能够抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭。也有研究表明,T-cadherin与肿瘤的恶性生物学特征,如肿瘤恶性增殖、凋亡、侵袭及转移等有密切相关。随着研究的不断深入,T-cadherin的各种功能逐渐被人们所认识。第一章T-cadherin在人胃癌中的表达情况及其与临床病理及预后的关系目的：探讨T-cadherin基因及蛋白在人胃癌中的表达情况及其与临床病理及预后的关系。方法：我们通过在103例胃癌组织样本和34例相应的癌旁组织样本进行Real-time qPCR、Western Blot和免疫组化检测,分析T-cadherin在基因和蛋白水平的表达情况及其与临床病理的关系。根据其中81例患者的回访资料研究T-cadherin与胃癌预后的关系。结果：通过34组胃癌组织及癌旁组织的Real-time qPCR检测发现,其中29例(85.3%)患者胃癌组织的T-cadherin的基因表达水平显著低于其对应的癌旁组织(X2=21.74,P<0.01)；Western blot检测和免疫组化发现,其中27例(79.4%)患者胃癌组织的T-cadherin的蛋白质表达水平显著低于其对应的癌旁组织(x2=19.46,P<0.01)。高分化腺癌、肿块最大径≤4cm、无淋巴结转移、未侵犯周围组织病例T-cadherin表达阳性率明显高于低分化腺癌、肿块最大径>4cm、淋巴结转移及侵犯周围组织病例(P<0.05或P<0.01)；T-cadherin表达与胃癌患者性别、年龄均无明显关系(P>0.05)。Cox回归分析结果显示,肿块最大径、TNM分期、淋巴结转移及侵犯周围组织器官与术后生存率呈负相关,分化程度及T-cadherin阳性表达与术后生存率呈正相关,是危险因素,均为独立的预后因子(P<0.05或P<0.01)；根据相对危险度的大小,提示T-cadherin表达对胃癌患者预后的影响最大。结论：1、T-cadherin的基因和蛋白在胃癌中的表达下调。2、T-cadherin蛋白表达下调与肿瘤大小、淋巴结转移、侵犯周围组织器官、分化程度及TNM分期有关。3、T-cadherin与胃癌的生存期密切相关,可能是胃癌预后的一个独立的预测指标,可能作为胃癌一种生物标志物。第一章T-cadherin过表达细胞模型的建立目的：筛选适合的细胞株建立体外T-cadherin过表达细胞模型并对其进行验证。方法：通过对人胃癌细胞株HGC-27、SGC7901、MGC-803细胞和正常胃粘膜细胞株GES-1中T-cadherin的表达情况进行检测,筛选出适合的细胞株作为体外胃癌细胞模型。构建T-cadherin过表达载体用于转染筛选出来的胃癌细胞株,使胃癌细胞高表达T-cadherin,并运用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time qPCR)和蛋白质印迹(Western Blot)进行验证。结果：Real-time qPCR检测人胃癌细胞株HGC-27、MGC-803、 SGC7901细胞和正常胃粘膜细胞株GES-1中T-cadherin基因的表达量分别为1.000、6.774、16.761和65.662；Western Blot检测T-cadherin蛋白的表达量分别为0.296、0.446、0.533和0.669。选择HGC-27细胞构建体外T-cadherin过表达细胞模型(pG-CMV/EGFP/Neo. T-cad)。实验分为正常组、阴性对照组和过表达组3组。成功转染后,Real-time qPCR和Western Blot检测正常组、阴性对照组和过表达组中T-cadherin基因和蛋白的表达量分别为1.000、1.291、150.018和0.306、0.312和0.974。结论：1、HGC-27细胞适于构建体外T-cadherin过表达细胞模型。2、pG-CMV/EGFP/Neo. T-cad能有效地转染HGC-27细胞,使HGC-27细胞中的T-cadherin高表达。第三章T-cadherin过表达对胃癌生物学特征的影响目的：探讨T-cadherin过表达对胃癌生物学特征的影响。方法：通过MTT比色法,Annexin V-PE/7-AAD双染法流式细胞术,Transwell细胞侵袭实验和迁移实验来探讨T-cadherin过表达对胃癌细胞的增殖、凋亡、侵袭和转移能力的影响。结果：在转染后第1、2、3、4、和5天时阴性对照组细胞相对存活率分别为97.6±2.9%,93.8±5.7%,98.1±3.0%,95.9±1.4%,92.3±1.6%,而过表达组细胞的相对存活率分别为93.5±2.1%,79.4±1.5%,72.7±1.2%,48.3±1.1%,30.0±1.0%。同时对两组各个时间点细胞相对存活率进行t检验,发现转染后第2天开始有显著性差异(P<0.01)。过表达组在转染后24小时HGC-27细胞的凋亡率为21.76±0.86%,而正常组和阴性对照组HGC-27细胞的凋亡率分别为5.98±0.44%和7.16±0.67%。过表达组与正常组和阴性照组相比,其凋亡率的差异有显著性(P<0.05)。过表达组、正常组和阴性对照平均每视野侵袭和迁移的细胞数目分别为15.24±1.06、42.35±1.65、41.12±1.26和24.08±1.12、51.43±2.14、45.35±1.67。过表达组与阴性对照组和正常组相比,侵袭和迁移的细胞数目的差异有显著性(P<0.05)。结论：1、T-cadherin过表达使人胃癌细胞HGC-27的生长和增殖受到抑制。2、T-cadherin过表达使人胃癌细胞HGC-27的凋亡增加。3、T-cadherin过表达使人胃癌细胞HGC-27的侵袭和迁移能力减弱。