猪圆环病毒2型（Porcine circovirus type 2,PCV2）是引起猪圆环病毒相关病（Porcine circovirus associated disease,PCVAD）的主要病原,该病是严重危害养猪业的病毒性传染病。PCV2主要侵害猪的免疫系统而导致免疫抑制,使感染猪对其他病原的易感性增高而诱发多种疾病的发生,是目前对养猪业危害最为严重的病原之一。对PCV2感染和致病机制的揭示将为防控提供理论依据。本研究团队在PCV2基因组中发现并鉴定了一个新的基因—“ORF5”,其编码产物ORF5蛋白可通过与宿主细胞蛋白的作用引起细胞周期阻滞、诱导内质网应激和细胞自噬。通过酵母双杂交试验发现在猪肺泡巨噬细胞（Porcine alveolar macrophages,PAMs）中存在多个与ORF5蛋白存在潜在互作的胞内蛋白,富含丝氨酸/精氨酸的剪接因子3（Serine/arginine-rich splicing factor3,SRSF3）是其中之一,对其在PCV2感染中的作用还未见研究报道。丝氨酸精氨酸剪接因子（Serine/arginine-rich splicing factor,SR）家族成员具有一个或两个N端RNA识别基序结构域（RNA-recognition motif,RRM）和一个精氨酸（Arginine）和丝氨酸（serine）的C端结构域。RRM结构域识别RNA,RS结构域参与蛋白质—蛋白质和蛋白质—RNA的相互作用。SRSF3是SR家族中最小的蛋白,在人类多种肿瘤细胞中高表达,调控细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡、细胞自噬和细胞衰老。研究发现,SRSF3可以调节人乳头瘤病毒（Human papilloma virus,HPV）衣壳蛋白的表达而影响病毒复制增殖,也能够选择性剪切天然免疫因子,影响宿主对疱疹病毒感染后诱导的免疫反应。本研究拟在明确SRSF3对PCV2复制的影响的基础上,筛选和鉴定与SRSF3互作的胞内蛋白,为PCV2-SRSF3-胞内蛋白的相互作用研究提供基础资料。首先对PCV2感染和ORF5转染体外细胞中SRSF3的转录和翻译水平进行检测,然后构建过表达和敲低表达SRSF3的细胞株,明确SRSF3对病毒复制的影响;通过免疫共沉淀（Co-immunoprecipitation,Co-IP）和激光共聚焦显微镜观察明确ORF5和SRSF3的相互作用,进而通过液相色谱串联质谱（Liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS）技术发现与SRSF3互作的胞内蛋白,筛选出关键胞内蛋白并进行互作研究。获得了以下研究结果:（1）通过RT-qPCR和Western blot检测发现,PCV2感染和表达ORF5蛋白的猪肺泡巨噬细胞（PAM）中,SRSF3在转录和表达均显著上调（P（27）0.05）;Co-IP和激光共聚焦显微镜观察发现,ORF5蛋白与SRSF3存在共定位。提示PCV2诱导了宿主细胞SRSF3的表达,通过ORF5蛋白与SRSF3发生互作。（2）过表达SRSF3的PAM中,PCV2 Cap基因和转录均升高（P（27）0.05）,敲低SRSF3表达后,Cap基因的转录水平降低（P（27）0.05）。结果表明,宿主细胞SRSF3可促进PCV2的复制。（3）在过表达SRSF3的细胞中,通过LC-MS技术筛选出6个可能与其互作的胞内蛋白。（4）PCV2感染和过表达SRSF3均上调血红蛋白亚β亚基（Hemoglobin subunit beta,HBB）的表达（P（27）0.05）;PCV2感染后诱导了SRSF3和HBB的共定位。本研究结果表明:SRSF3在PCV2感染细胞中表达上调并促进病毒的复制,可与PCV2 ORF5蛋白发生互作,PCV2的感染诱导了SRSF3和HBB的共定位,为进一步深入研究SRSF3在PCV2感染的机制提供了基础资料。