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目的:本文通过检测鸡血藤、葛根、千里光等药材中羽扇豆酮的量,并分离、鉴定及测定芭蕉、香蕉、野蕉的花和苞片中羽扇豆酮的含量,为寻找或扩大羽扇豆酮原药材资源提供参考;对芭蕉根提取物中羽扇豆酮的进行纯度检测,为羽扇豆酮的研究开发和利用提供依据;并验证和评价羽扇豆酮改善2型糖尿病胰岛素抵抗的效果,及进一步研究其作用机制,为羽扇豆酮开发为抗糖尿病的一类新药提供重要的科学依据。 方法: 1.采用超高效液相色谱法(UPLC)对鸡血藤、葛根、千里光等药材进行检测、分析,评价药材中羽扇豆酮的量;利用硅胶柱色谱、质谱(MS)及核磁共振技术(NMR)对香蕉、芭蕉、野蕉的花和苞片进行羽扇豆酮分离及结构鉴别,并以高效液相色谱法(HPLC)测定其含量。 2.建立芭蕉根提取物中羽扇豆酮HPLC的含量测定方法,评价不同批次提取物中羽扇豆酮的含量,分析羽扇豆酮在提取物中的纯度。 3.建立2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗模型,灌胃给予羽扇豆酮,验证羽扇豆酮对大鼠的体重、血糖、血清FFA、LEP、HbA1C及脂代谢的影响,评价羽扇豆酮改善2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的药效作用的稳定性,并采用酶联免疫吸附法(Elisa)检测血清中ADPN及PAS染色法测定肝糖原的量,较为全面评价羽扇豆酮改善2型糖尿病胰岛素抵抗的效果。 4.利用Western Blot法测定给药羽扇豆酮后大鼠骨骼肌中的GLUT4、InsR、IRS-1及IRS-2和脂肪组织中GLUT4、InsR、IRS-1、IRS-2及PPAR-γ蛋白表达的情况,并用Elisa法测定血清中SOD、MDA、GSH-Px含量及对大肠肠系膜组织进行病理切片的观察研究。 结果: 1.在UPLC-DAD条件下,检测鸡血藤、葛根、千里光等药材中的羽扇豆酮有干扰,而在UPLC-ELSD条件下检测羽扇豆酮没有干扰,但其含量均低于检测限;香蕉、芭蕉、野蕉的花和苞片中存在羽扇豆酮,但三个品种羽扇豆酮含量差异较大,同植株老花和嫩花及老苞片和嫩苞片的含量均以老的部位高,同植株花和苞片的含量均以苞片的高。 2.建立的HPLC含量测定方法,具有快速,简便,重现性好,回收率高等特点,且三批芭蕉根提取物中羽扇豆酮的含量均大于97%,尤其新分离的芭蕉根提取物中羽扇豆酮的含量大于98%。 3.连续给药30天后,正常组(给予基础饲料)大鼠的体重呈升高趋势,羽扇豆酮的高、中、低剂量组及阳性药物组大鼠的体重变化不大,模型组大鼠的体重有明显的下降;与模型组比较,给药后的第二周、第三周、第四周,不同剂量的羽扇豆酮均具有降血糖作用,能降血清中FFA、HbA1c、 LEP的含量,能使肝糖原合成及ADNP含量增加,并降低TC、TG、LDL-C、TC/HDL-C比值等脂代谢指标,但对HDL-C具有一定的升高作用。 4.羽扇豆酮能降低MDA及升高GSH-Px的含量,能使大鼠骨骼肌中的GLUT4、InsR、IRS-1、IRS-2及PPAR-γ和脂肪组织中GLUT4、InsR、IRS-1、IRS-2及PPAR-γ蛋白的表达增加,并能使大肠肠系膜组织的淋巴细胞排列紧密且细胞个数增加,但对SOD的影响不大。 结论: 1.所收集到的鸡血藤、葛根、千里光等药材含羽扇豆酮的量较低,不能作为羽扇豆酮原材料的来源,而香蕉、野蕉、芭蕉的花和苞片可作为羽扇豆酮原材料,但要注意品种、部位中羽扇豆酮含量的差异。 2.建立的HPLC法可用于芭蕉根提取物的质量控制,羽扇豆酮的纯度能够符合中药新药研究的材料要求,但羽扇豆酮的稳定性可能会受环境等因素的影响,应注意保存。 3.羽扇豆酮改善2型糖尿病胰岛素抵抗的药效作用稳定、可靠,其作用机制还与其能清除体内的自由基、氧化物及防止氧化物的分解、上调骨骼肌及脂肪组织中的GLUT4、InsR、IRS-1、IRS-2及PPAR-γ蛋白表达和修复肠系膜组织的淋巴细胞有关。