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ZFP (Zinc Finger Proteins)转录因子是植物中的一大类重要转录调控子,主要在植物生长发育、抗逆境胁迫等方面具有重要的作用。本研究从柽柳转录组数据中鉴定出一条盐胁迫响应的锌指蛋白基因,命名为ThZFP3,该基因全长1335 bp,编码444氨基酸,属于CCCH型锌指蛋白基因家族,编码蛋白相对分子质量48 491.6 Da,理论等电点(PI)为8.08。构建植物表达载体pBI121-GFP-ThZFP3,利用基因枪技术瞬时转化洋葱表皮研究亚细胞定位,结果表明ThZFP3蛋白定位在细胞核中。利用酵母双杂交技术鉴定ThZFP3转录激活结构域,确定其转录激活区位于C端的225～280氨基酸区段。利用实时荧光定量RT-PCR技术分析显示,该基因受高盐、干旱诱导上调表达,暗示ThZFP3可能在柽柳抗旱耐盐过程中发挥重要作用。构建ThZFP3基因的过表达载体,转化拟南芥,获得T3代转基因株系。对野生型和转基因株系拟南芥进行NaCl和Mannitol胁迫处理,胁迫条件下转基因株系的萌发率、根长、鲜重及长势都优于野生型株系,表明ThZFP3基因能提高转基因拟南芥的耐盐性和耐旱性。构建RNAi载体pC5941-ThZFP3,利用瞬时转化技术将农杆菌pROKⅡ-ThZFP3、 pC5941-ThZFP3和pROKⅡ转入柽柳,获得过表达(OE)、抑制表达(RNAi)和对照(Control)转基因植株,分析三种转基因植株在NaCl和Mannitol胁迫下的抗逆能力。DAB、NBT和Evans blue组织化学染色结果显示,过表达植株(OE)细胞内的02-和1-1202含量明显低于比Control和RNAi植株,说明过表达株系受胁迫后细胞膜结构较为完整,受损伤程度低,而抑制表达株系细胞受损伤程度最严重。测定三种转基因植株的失水率、叶绿素含量、PRO含量、H202含量、MDA含量、POD和SOD活性等生理指标,结果显示过表达植株(OE)的失水率、ROS含量和MDA含量相对最低,叶绿素含量、PRO含量、POD活性和SOD活性相对最高;RNAi植株的失水率、ROS含量和MDA含量最高,叶绿素含量、PRO含量、POD和SOD活性相对最低。以上研究表明,ThZFP3能够提高转基因植株活性氧(ROS)清除能力,降低细胞受损伤程度,从而提高植株的抗逆能力。