【摘 要】
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启动子在植物基因表达调控过程中起着重要作用。对于植物基因启动子的克隆及其功能研究有助于了解信号传递途径和基因表达调控模式,为植物转基因工程研究提供理论依据。组织
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启动子在植物基因表达调控过程中起着重要作用。对于植物基因启动子的克隆及其功能研究有助于了解信号传递途径和基因表达调控模式,为植物转基因工程研究提供理论依据。组织特异性启动子作为启动子的一种,在特定组织和一定发育阶段启动基因的表达,能减少不必要的浪费。PIP5K基因家族作为根特异性转录调控因子的一种,在协调植物的生长中起着至关重要的作用,特别是应对环境因素时,有启动和促进根毛尖端增长的功能。本实验通过生物信息分析PIP5K基因序列,克隆出PIP5K基因的启动子,并经过启动子的删减实验,水稻的遗传转化及水稻组织的GUS染色实验等,取得结果如下:1.根据已知报告基因分析预测,设计出特异性引物,以玉米B73基因组DNA为模板,扩增出该基因的启动子部分,命名为P2036。将P2036启动子的序列放在启动子顺式作用元件预测网站上进行分析,预测到存在TATA盒、CAAT盒、六个光应答元件和六个与诱导应答先关元件,预测该启动子是一个具有完整功能的启动子。2.依次克隆出4个5’端缺失启动子,5个启动子的长度依次为2036bp、1440bp、996bp、651bp和344bp。将5个启动子与含有GUS报告基因的质粒pCAMBIA1301连接并构建出5个5’端缺失启动子载体。3.利用农杆菌介导法将构建的所有植物表达载体转化水稻,获得了34棵转基因植株,对获得的转基因植株进行潮霉素检测,其中21棵检测为阳性。将检测为阳性的转基因各个组织进行GUS染色,根据染色结果得出,GUS基因均未在组织中未发现有表达。
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