目的：将目前公认对Ⅱ型糖尿病有良好治疗效果、已获得临床应用的多肽药物exendin-4,与另一个可用于防治糖尿病慢性并发症的人溶菌酶N端多肽串联并进行原核表达、纯化及鉴定。该设计的嵌合多肽可被人体内自然存在的凝血酶和二肽基肽酶水解,释放出发挥不同药理作用的人溶菌酶N端多肽和exendin-4,从不同环节发挥治疗糖尿病的作用,为探索一种新型双靶向治疗糖尿病的多肽药物奠定实验基础。方法：通过RT-PCR从人外周血获得人溶菌酶N端74个氨基酸的基因序列,然后利用重组PCR技术将其与人工合成的exendin-4基因序列相连接,连接序列为一段可被凝血酶和二肽基肽酶分别切割的短肽基因序列。以嵌合基因hLYZ（N74）-exendin-4与质粒pET-32a（+）构建原核表达载体,转化大肠杆菌BL21（DE3）并诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting鉴定表达的蛋白。经表达条件优化,大量制备重组蛋白,变性条件下进行镍离子亲和层析纯化。对纯化后的重组蛋白进行复性,用肠激酶切割复性蛋白以获得目的多肽。重组蛋白经凝血酶切割和HPLC分离后,以质谱鉴定所获得的多肽水解片段。结果：重组质粒pET-32a／hLYZ（N74）-Ex4构建正确,序列分析结果与预期完全相符；重组蛋白获得高效表达,37℃诱导4h、IPTG浓度为0.6mmol／L时表达量最高,约占菌体蛋白总量的30%；SDS-PAGE结果显示重组蛋白分子量约为30kD,Western blotting检测表明重组蛋白为单一清晰条带,与抗His-tag单克隆抗体有较强的特异性反应；重组蛋白表达主要以包涵体形式存在,经亲和层析纯化后获得了高纯度的重组蛋白；对重组蛋白的透析复性研究表明,4℃条件下、蛋白浓度为50μg／mL、添加L-精氨酸和GSH/GSSG时,蛋白复性率较高,达23.8%；复性蛋白经肠激酶切割可获得较好纯度的目的嵌合多肽；重组蛋白经凝血酶切割,检测到相对分子质量为4341.0的exendin-4片段。结论：hLYZ（N74）-exendin-4嵌合蛋白的原核表达质粒构建成功,并实现了重组蛋白的高效表达。重组蛋白能够被肠激酶切割产生目的多肽,设计引入的凝血酶切割位点有效。