哺乳动物胎盘的发生是成功妊娠的关键环节，涉及滋养层细胞的增殖、分化、对子宫内膜精确地侵袭和母体血管重建等过程。滋养层细胞的过度增殖和侵入与葡萄胎、绒毛膜上皮癌等的形成有关，侵入不足则会造成自然流产、胎儿宫内发育迟缓(intrauterine growthretardation，IUGR)等临床产科疾病。　　小鼠胚胎植入时，靠近内细胞团(inner cell mass，ICM)的极滋养层细胞分化为具有侵袭能力的外胎盘锥(ecto-placental cone，Epc)和绒毛膜，随后Epc有节制性的向子宫蜕膜入侵，并分化成海绵滋养细胞(Spongiotrophoblast，Sp)。绒毛膜与尿囊融合，折叠形成绒毛，其滋养层细胞分化并融合形成合体滋养层细胞和单核滋养层细胞，与胎儿血管共同构成胎盘的迷路层(labyrinth，Lab)。成熟的小鼠胎盘(D14.5)主要由3层构成:母体蜕膜层，海绵滋养层，迷路层。尽管一系列激素、各转录因子、生长因子和细胞因子等通过旁分泌或自分泌方式参与了胎盘的形成，但调节胎盘发生的因素至今远未阐明。　　γ-氨基丁酸(γ-Amino butyric Acid，GABA)是一种非蛋白质氨基酸，是脊椎动物中枢神经系统主要的抑制性神经递质，由谷氨酸经谷氨酸脱羧酶(L-glutamate decarboxylase，GAD65/GAD67)作用合成。GABA受体根据其不同的药理特征分成A、B、C三种类型，其中，GABARA和GABARC属配体门控Cl-通道受体，GABARB属于G蛋白耦联受体家族并相伴有K+和Ca2+通道。近十年来的研究表明，除中枢神经系统外，GABA还在多种外周组织例如胰腺、肝脏、子宫、胎盘和卵巢等参与细胞间的信息传递及内分泌调节。研究表明孕酮及其代谢中间物四氢孕酮能通过A型受体参与大鼠妊娠期间子宫肌肉静息状态的维持。A型受体的π亚基(GABRP)在人类胚胎植入的窗口期以及分泌晚期的子宫内膜中显著上调，提示GABA信号与子宫内膜的蜕膜化有关。此外，GABA受体的激活对多种肿瘤细胞的侵袭和转移具有促进/抑制作用，迄今国内外还未见GABA信号是否参与胎盘发育的相关报道。　　本实验室的前期研究发现GABA与GABARA作用，通过降调cyclinD3抑制小鼠子宫间质细胞的蜕膜化。GABA通过GABARB促进Epc的外延生长，提示GABA信号可能参与了小鼠胎盘的发育。在本研究中我们首先检测GABA信号在孕鼠胎盘形成期的表达，并通过特异性的受体干预手段，探讨了GABA及其受体在胎盘形成中的作用，这将丰富对胎盘形成调节的认识，有助于进一步理解胎盘发生异常所致的产科疾病的发病机理。　　第一部分 GABA信号在小鼠胎盘形成期的表达　　目的:检测GABA信号在小鼠胎盘形成期的表达。　　方法:RT-PCR和Western Blot检测小鼠D10-D14胎盘中GABRP、B受体B1亚基(GB1)mRNA及蛋白表达的水平;免疫组化检测GABA信号在D9-D14胎盘中的表达情况。　　结果:GABRP、GB1的mRNA及蛋白在D10-D14胎盘中都有表达。GABRP、GB1和GABA都表达于细胞质，GABRP蛋白只表达于D9-D14胎盘的蜕膜区，且在D10和D13表达最强。GABA和GB1表达部位一致，都主要定位于D9的Epc、D10的绒毛膜板(Chorionic plates，Cp)、滋养层巨细胞(Trophoblast giant cell，TGC)和D11-D14的Sp。合成酶GAD65/67与GABA有相同的表达模式，但亚细胞定位不同，GAD65主要表达于细胞核，而GAD67主要表达于细胞核和胞质。　　结论: GABA信号动态表达于D9-D14的小鼠胎盘中，我们猜测GABA信号可能参与了小鼠胎盘的形成过程。　　第二部分 GABA信号对小鼠胎盘形成的影响　　第一节不同浓度的GABA对小鼠胎盘形成的影响　　目的:探讨GABA对小鼠胎盘形成的影响。　　方法:将昆明孕鼠随机分为低、中、高GABA溶液组，对照组和空白组，每组3只，GABA溶液组于D7-D13分别腹腔注射0.04g/kg、0.20g/kg、1.00g/kg GABA溶液，对照组注射生理盐水，空白组不作任何处理。D14称量各组胎盘和胚胎，HE染色观察胎盘形态学变化，免疫组织化学检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)表达情况。　　结果:与对照组比较，不同浓度的GABA处理组的胚胎重量均显著下降(P＜0.001)。随着GABA浓度增加，胎盘蜕膜区明显增厚，而海绵滋养层细胞变得较密集并失去海绵样结构，迷路滋养层变薄，胎儿血窦及母体血管减少。0.20g/kg和1.00g/kg GABA处理组的蜕膜区、海绵滋养层和迷路区中PCNA阳性细胞数量明显增多。　　结论:GABA可能通过调节胎盘细胞的增殖，参与了小鼠胎盘的形成过程。　　第二节激活或抑制GABA受体对小鼠胎盘形的影响　　目的:探讨激活或抑制GABARA/B对小鼠胎盘形成的影响。　　方法:将孕鼠随机分为14组，每组3只，于D7-D13分别腹腔注射不同浓度的A型受体激动剂(0.0095 mg/kg、0.095 mg/kg、0.95 mg/kg)，A型受体抑制剂(0.0184 mg/kg、0.184 mg/kg、1.84 mg/kg)，B型受体激动剂(0.01068mg/kg、0.1068 mg/kg、1.068 mg/kg)，B型受体抑制剂(0.01329 mg/kg、0.1329 mg/kg、1.329 mg/kg)。D14时称取各组胎盘、胚胎重量并做HE染色观察胎盘形态变化，并检测激动/抑制A型受体后血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)的表达，激动/抑制B型受体后胎盘细胞的增殖和凋亡情况。　　结果:与对照组比较，0.95 mg/kgGABA A型受体激动剂组蜕膜区血管、迷路区母胎有核红血细胞的数量显著性增加(P＜0.05)，同时迷路区VEGF的表达增加，1.84mg/kg A型受体抑制剂组胎盘、胚胎的重量显著性降低(P＜0.05)，迷路区VEGF的表达降低。0.01068 mg/kg GABA B受体激动剂组海绵滋养层和迷路区的厚度明显增加，PCNA表达增加，细胞凋亡降低，而1.068 mg/kg B受体激动剂组胎盘和胚胎的重量显著性降低(p＜0.05），且增殖降低，凋亡增加。B型受体抑制剂组Sp区厚度变小，同时失去了海绵状结构，迷路区滋养细胞减少，PCNA表达明显降低。　　结论:GABA可能与其受体结合，参与小鼠胎盘形成过程中母胎血管的发生和海绵滋养层的形成。