【摘 要】
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肝脏是药物在体内的重要生物转化场所,肝微粒体中有着丰富的代谢酶,负责内源及外源化合物的代谢,这其中包括主要的I相药物代谢酶CYP450氧化酶。因此肝微粒体已成为一个重要的体
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肝脏是药物在体内的重要生物转化场所,肝微粒体中有着丰富的代谢酶,负责内源及外源化合物的代谢,这其中包括主要的I相药物代谢酶CYP450氧化酶。因此肝微粒体已成为一个重要的体外模型用于药物代谢的研究,特别是药物体外酶促动力学和药物相互作用的研究。借助体外数据进而可以预测药物在体内的状况以及在临床用药中是否有药物相互作用发生,为更为安全的用药提供一个保证。本研究的目的是运用大鼠肝微粒体体外药物代谢模型,对甘草次酸与士的宁的体外代谢与代谢相互作用进行初步探讨。
首先差数离心法制备经苯巴比妥钠诱导过的大鼠肝微粒体,采用高效液相-紫外检测(HPLC-UV)的方法测定肝微粒体孵育液中甘草次酸与士的宁的浓度,通过酶促反应动力学实验分别求得甘草次酸与士的宁在大鼠肝微粒体中的米氏常数Km,最大反应速率Vmax,体外半衰期t1/2,以及体外固有清除率CLint;其次用特异性抑制剂的方法分析可能参与甘草次酸与士的宁代谢的亚酶;再次选取各主要亚酶探针底物,分别通过甘草次酸、士的宁与CYP450各亚酶的探针底物相互作用,求得IC50来判断对各探针底物代谢的抑制力大小,进而推测对亚酶催化活性的影响。最后通过体外肝微粒体实验来研究甘草次酸与士的宁是否有代谢相互作用以及相互作用的方式。
通过上述实验得出以下结论:(1)酶促动力学实验数据说明甘草次酸与士的宁极易在大鼠肝微粒体中代谢,进而推测肝脏很有可能是甘草次酸与士的宁主要的代谢与解毒场所;(2)在大鼠肝微粒体中催化甘草次酸与士的宁代谢最主要的亚酶很可能就是CYP3A1/2;(3)甘草次酸对CYP2C9/10催化的双氯芬酸4-羟基化代谢有明显的强抑制作用,进一步推测甘草次酸可能会抑制CYP2C9/10亚酶活性。士的宁可以轻微抑制CYP1A1/2的催化活性;(4)甘草次酸较弱的抑制了士的宁在大鼠肝微粒体中的代谢而且是竞争型抑制。
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