【摘 要】
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第一部分:携带hIGF-1基因重组载体的构建及在真核细胞的表达胰岛素样生长因子-1(IGF-1)是在软骨发育和软骨自稳态调节中最重要的生长因子之一,能刺激软骨细胞分裂增殖,并促进
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第一部分:携带hIGF-1基因重组载体的构建及在真核细胞的表达胰岛素样生长因子-1(IGF-1)是在软骨发育和软骨自稳态调节中最重要的生长因子之一,能刺激软骨细胞分裂增殖,并促进软骨细胞合成Ⅱ型胶原和蛋白聚糖,维持软骨细胞的表型等。随着基因转移技术的发展,将外源基因导入特定靶细胞中使之高效稳定表达,进而发挥作用已完全成为可能。本实验通过构建含截短型hIGF-1基因和增强型绿色荧光蛋白标记基因的重组真核载体并检测其在真核细胞HEK293细胞的蛋白表达,为软骨组织工程种子细胞MSCs的基因修饰奠定实验基础。目的构建增强型绿色荧光蛋白基因标记的hIGF-1真核表达载体,为软骨组织工程的种子细胞MSCs的基因修饰提供方便、实用的载体工具。方法根据GeneBank公布的hIGF-1序列设计PCR引物,从质粒pcDNA3.1-hIGF-1中扩增出截短型hIGF-1,亚克隆至pMD-T18载体,测序鉴定后酶切出目的基因片段插入pIRES2-EGFP中,构建成真核表达质粒pIRES2-EGFP-hIGF-1,经PCR及双酶切鉴定正确后转染HEK293细胞,通过荧光观察直观检测hIGF-1的表达。结果成功构建了增强型绿色荧光蛋白基因标记的真核表达质粒
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