论文部分内容阅读
用于化疗的抗肿瘤药物多为非选择性药物,且存在水溶性差、半衰期短、易产生耐药性等毒副作用。将抗肿瘤药物负载于纳米颗粒上不仅可减小药物的毒副作用,也可通过肿瘤组织的EPR效应增加药物在肿瘤部位的积累量,从而提高药物疗效。因此,本文旨在设计一种可控还原刺激响应释药的双重载药前药胶束,这种载体可携带药物通过血液循环到达肿瘤病灶部位,实现被动靶向的目的,还可实现药物的可控制释放,从而提高药物的疗效。1.制备还原敏感型前药胶束、研究体外释药行为及细胞活性采用化学合成的方法,以甲氨喋呤(Methotrexate, MTX)为第一种药物模型,制备：二硫键桥连的、连接方式不同的MTX-SS-PEG-SS-MTX前药及PEG-SS-MTX-SS-PEG前药,并采用透析法将前药制备成粒径分布均匀的聚合物前药胶束。分别采用荧光分光光度计(Fluorescence Spectrophotometry)、动态光散射粒度仪(Dynamic Light Scattering, DLS)、透射电子显微镜(Transmission Electron Microscopy, TEM)等对PEG-SS-MTX-SS-PEG前药胶束的临界胶束浓度(Critical Micellar Concentration, CMC)、粒径和粒径分布及形貌进行表征,结果表明成功制备了临界胶束浓度为52.48μg·mL-1、水力直径为235nm、形貌规整、分散均匀的聚合物前药胶束。在此基础上,采用物理方法将第二种药物模型阿霉素(Doxorubicin, DOX)包载在胶束疏水性内核中,得到双重载药的聚合物前药胶束。在模拟肿瘤细胞内10mM谷胱甘肽(Glutathione, GSH)环境中进行体外释药。这种前药胶束的二硫键被GSH还原为硫醇,胶束结构快速解聚,在体外释药10h时MTX的累积释放率达到了65%,72h时累积释放率达到80.51%；72h时,胶束中DOX的累积释放率为24.76%。表明所设计的还原敏感型双重载药聚合物前药胶束PEG-SS-MTX-SS-PEG/DOX能够在GSH作用下快速释放化学键合的药物MTX,满足快速抑制肿瘤细胞的需求；同时,胶束疏水内核中的DOX在胶束解聚过程中逐步释放,达到长效抗肿瘤效应,实现双重给药的目的。以肝癌细胞HepG2为细胞模型,考察了聚合物胶束抑制癌细胞生长繁殖的效果。当药物浓度均为200μg·mL-1时,含有单载药胶束PEG-SS-MTX-SS-PEG的环境中,癌细胞的存活率为55.09%；而含有双重载药胶束PEG-SS-MTX-SS-PEG/DOX的环境中,癌细胞的存活率仅为39.41%。结果表明双重载药的聚合物胶束PEG-SS-MTX-SS-PEG/DOX对癌细胞生长繁殖的抑制效果明显优于单载药的聚合物胶束PEG-SS-MTX-SS-PEG。2.制备可控还原敏感型前药胶束及研究体外药物释放行为将生物相容性好、安全性高的Pluronic F127(PEO98-PPO67-PEO98)三嵌段共聚物与上述制备的前药混合透析,制备了具有一定粒径分布的可控还原敏感型单载药聚合物前药胶束F127/PEG-SS-MTX-SS-PEG.并采用物理方法将DOX负载于前药胶束F127/PEG-SS-MTX-SS-PEG的疏水内核中得到双重载药的聚合物胶束F127/PEG-SS-MTX-SS-PEG/DOX。分别采用荧光分光光度计、动态光散射粒度仪、透射电子显微镜等对F127/PEG-SS-MTX-PEG前药胶束的临界胶束浓度、粒径和粒径分布及形貌进行表征,表明成功制备了临界胶束浓度为42.72μg·mL-1、平均水力直径为295.8nm、形貌规整、分散均匀的聚合物前药胶束。在体外模拟肿瘤细胞内10mMGSH环境中,这种含有F127的前药胶束的二硫键被GSH还原为硫醇,胶束结构解聚,在体外释药72h时MTX的累积释放率仅为18.48%,DOX的累积释放率为28.33%。表明F127的加入能够有效降低化学键合药物MTX的释放速度,同时,胶束疏水内核中的DOX在胶束结构解聚的过程中得以释放,实现双重给药的目的。且设计的可控双重给药聚合物前药胶束F127/PEG-SS-MTX-SS-PEG/DOX具有一定的控制释放作用。