【摘 要】
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h-CR1基因（Human Cell Regulatorl，细胞信号调节因子1，简称h-CR1，AC021016）为医科院医药生物技术研究所代谢工程室克隆发现的新基因，初步研究表明该基因与肌肉收缩调控以及细胞信息传导和凋亡过程相关，为一种膜蛋白。蛋白文库检索显示在小鼠、大鼠、牛、猪等动物中有与h-CR1保守序列，而在酵母和苍蝇中没有相似序列，表明CR1基因有可能局限于哺乳动物基因组中。 本研
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h-CR1基因（Human Cell Regulatorl，细胞信号调节因子1，简称h-CR1，AC021016）为医科院医药生物技术研究所代谢工程室克隆发现的新基因，初步研究表明该基因与肌肉收缩调控以及细胞信息传导和凋亡过程相关，为一种膜蛋白。蛋白文库检索显示在小鼠、大鼠、牛、猪等动物中有与h-CR1保守序列，而在酵母和苍蝇中没有相似序列，表明CR1基因有可能局限于哺乳动物基因组中。 本研究通过生物信息学分析设计合成引物，分离C57BL／6J小鼠脾脏细胞、提取总RNA，采用RT-PCR技术克隆得到了450bp大小的目的条带，经测序证明包含一个与h-CR1基因高度同源的完整ORF，将此序列命名m-CR1。比较发现，m-CR1与h-CR1蛋白具有极高的保守性，均由142个氨基酸编码组成，两者间13处氨基酸差异有10处为同族氨基酸变异，同源性达到90.1％。 利用质粒pPIC9和pET24a（+）DNA构建了h-CR1基因毕赤酵母GS115表达载体及N端和／或C端带有融合蛋白的多种大肠杆菌BL21-CodonPlus（DE3）-RIL表达载体。建立了h-CR1基因的甲醇酵母整合分泌型表达系统，以及N端融合有T7-Tag的大肠杆菌包涵体型高效表达系统。最终确定采用后者进行大量表达的蛋白制备抗体。用同样方法使m-CR1基因在大肠杆菌系统中获得成功表达。 根据CR1蛋白为膜蛋白的理化性质，采用了包涵体溶解液透析收集沉淀、制备电泳、电洗脱的方法进行融合蛋白的纯化，得到纯度约95％，浓度约2mg／ml的蛋白样品。利用纯化的Tag-hCR1和Tag-mCR1融合蛋白免疫兔子制备了兔抗二者的多克隆抗体。分别用免疫单扩、ELISA和Western等多种方法进行定性、定量分析，检测所制备抗体滴度达到1:1×10~5以上，特异性较好。本论文的工作为进一步在免疫学及细胞学方面研究CR1的生物学功能提供了可能。
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