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生长抑素(somatostatin,SST)在胃肠道活动的各种调控中起到关键性作用,由于它在大脑、垂体、胰腺、胃肠道、肾上腺、甲状腺、肾和免疫系统等多种生理功能的调节作用而受到关注。其作用包括调控内分泌和外分泌性分泌、调节神经递质,抑制胃肠蠕动、营养和离子的吸收,调节血管收缩。SS工具有抗肿瘤活性,调控正常和肿瘤细胞的增殖。
SST与其受体结合而发挥作用,生长抑素受体(somatostatin receptor,SSTR)广泛分布于正常组织器官和癌组织,许多人类肿瘤表达两种以上SSTR亚型。多数表达SSTR的肿瘤细胞可以受到SST类似物的调节和限制,因此,SSTR在肿瘤细胞中的表达逐渐受到越来越多的关注。
SSTR在细胞的生长过程中起到了非常重要的抑制作用,具有强大的抗癌作用。前期的研究结果显示,胃癌细胞SGC-7901和BGC-823不表达SSTR3mRNA,但其分子机制尚未阐明。本研究应用PCR技术、PCR-PAGE-银染技术和甲基化特异性PCR技术观察胃癌细胞SGC-7901和BGC-823 SSTR3基因外显子的异常、SSTR3基因相关微卫星位点(microsatellite locus,MSL,)的杂合性缺失(lossof heterozygosity,LOH)和SSTR3基因启动子区域异常甲基化,从遗传学和表观遗传学分析胃癌细胞SSTR3基因的异常,探讨胃癌细胞SGC-7901和BGC-823SSTR3 mRNA不表达的分子机制。
材料与方法
1.基因组DNA提取常规酚-氯仿DNA提取法,分别提取10例正常人外周血、培养的胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823基因组DNA。
2.胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901 SSTR3基因外显子检测应用PCR技术分别克隆胃癌细胞系BG-C-823和SGC-7901 SSTR3基因外显子,序列分析,检测其外显子突变；DNAMAN软件分析氨基酸序列异常。
3.胃癌细胞系BGC-823细胞和SGC-7901SSTR3基因相关MSL分析SSRhunter1.3软件检测出SSTR3基因上游的两个MSL,分别命名为MSL1和MSL2。应用PCR-PAGE-银染技术观察胃癌细胞系BGC-823细胞和SGC-7901SSTR3基因相关MSL异常。
4.胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901 SSTR3基因启动子区域异常甲基化分析应用甲基化特异性PCR-序列分析技术,检测胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823SSTR3基因启动子区域异常甲基化。
结果：
1.胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901 SSTR3基因外显子检测SSTR3基因外显子的扩增产物为1431bp；序列分析显示,胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823SSTR3基因外显子均存在点突变；DNAMAN软件分析其为同义突变,不影响SSTR3基因的表达。
2.胃癌细胞系BGC-823细胞和SGC-7901 SSTR3基因相关MSL分析MSL1扩增产物为243bp,MSL2扩增产物为234bp；PAGE-银染检测显示,MSL1在胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823均出现LOH,MSL2无多态性。
3.胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901 SSTR3基因启动子区域异常甲基化分析PCR产物长度为170bp；序列分析显示,胃癌细胞系BGC-823和SGC-7901SSTR3启动子区域均出现CpG岛甲基化。
结论：
1.胃癌细胞系BGC-823和SCG-7901 SSTR3基因外显子的点突变为同义突变。
2.胃癌细胞系BGC-823和SCG-7901 SSTR3基因相关MSL1存在LOH。
3.胃癌细胞系BGC-823和SCG-7901 SSTR3基因启动子区域高甲基化。