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传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)感染鸡导致传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD),主要以侵害雏鸡淋巴组织,特别是中枢免疫器官——法氏囊,导致机体的免疫抑制。近年来,由于各地IBDV变异株、超强毒株的出现,使该病出现新的特点,传统疫苗免疫不能够进行有效防控。VP2是IBDV主要结构蛋白,包含主要保护性抗原表位。因此,VP2重组蛋白的表达能够为IBDV的防治和诊断试剂的开发提供理论依据和技术支撑。本研究根据GenBank中已发表的IBDV NB株VP2蛋白基因序列,结合蛋白成熟过程中VP2的裂解位点和抗原集中区的分析,设计合成VP2成熟蛋白基因引物,以IBDV VP2的cDNA为模板,PCR扩增VP2成熟片段,并与pMD18-T-simple载体连接,构建pMD-VP2重组克隆质粒,转化至DH5α,通过菌液PCR、双酶切和基因测序筛选阳性克隆。然后,利用限制性内切酶EcoRⅠ和KpnⅠ,双酶切阳性重组克隆质粒pMD-VP2、真核表达载体pPICZαC,回收目的基因,T4 DNA连接酶进行连接,构建pPICZαC-VP2真核重组表达质粒,转化至DH5α。利用菌液PCR、双酶切和基因测序筛选阳性重组表达质粒,成功构建真核表达质粒,命名为pPICZαC-VP2,PmeⅠ线性化阳性重组表达质粒,电转化法转化至毕赤酵母X-33中。ZeocinTM抗性筛选和菌液PCR,筛选获得阳性重组子,接种于BMMY培养基后用甲醇进行诱导培养,SDS-PAGE分析和Western blotting鉴定重组蛋白。研究结果显示,扩增出长度为1323bp的VP2成熟蛋白基因。甲醇诱导重组真核表达质粒,SDS-PAGE检测显示在60KDa处有一条比理论值偏大的条带;Western blotting鉴定,重组蛋白能够与IBDV阳性血清特异性结合。以上研究结果表明,本研究成功获得了IBDV VP2重组蛋白。