【目的】本研究以两株犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)为研究对象,就其磷蛋白基因与GenBank中注册的十种不同毒株的磷蛋白基因进行遗传进化分析,以期为犬瘟热(Canine distemper,CD)分子流行病学调查和防制措施研究提供科学依据。同时,以犬源CDV磷蛋白基因原核表达,旨在为建立CD快速、简便、特异的诊断方法及其基因工程疫苗研制奠定实验基础。【方法】本实验以CDV基因组RNA为模板进行磷蛋白基因的RT-PCR扩增、克隆和测序,应用DNAStar和Mega(version3.1)分析软件对两株CDV与GenBank中的十种不同毒株CDV磷蛋白基因的核苷酸序列及推导氨基酸序列进行同源性和系统进化关系分析。应用DNA重组技术,构建犬源CDV磷蛋白基因的原核表达系统,以SDS-PAGE、间接ELISA和Western blot方法鉴定表达产物的免疫活性。【结果】研究显示,虎源和犬源CDV毒株磷蛋白基因序列与GenBank中的10种不同毒株的磷蛋白基因序列AY466011、AY964113、AF181446、AY386315、AF259549、AJ582385、AB212727、AB212962、AY130857和U53712的一段387bp保守核苷酸序列同源性分别为93%和96%、95%和95%、93%和99%、91%和94%、91%和94%、95%和96%、94%和96%、96%和98%、98%和97%、93%和95%。核苷酸序列比对分析发现12株病毒的磷蛋白基因保守序列上有6个核苷酸变异,其中2243C和2465A仅见于虎的序列及序列AY466011和AY130857,种系进化分析也显示三者的亲缘关系最近,表明2243位、2465位的核苷酸突变可能与犬瘟热病毒种间传播存在某种关系。成功获得犬源CDV磷蛋白基因重组菌,于37℃用1.0mmol/L IPTG诱导6h后表达大小约为92ku的融合蛋白,纯化融合蛋白经Western-blot和间接ELISA检测,可与抗CDV多克隆抗体发生特异性反应,表明获得重组磷蛋白。【结论】12株CDV的磷蛋白基因保守序列区有6个核苷酸变异,该基因保守区遗传进化分析显示虎源与浣熊源(AY466011)、貂源(AY130857)毒株间存在较近的亲缘关系。成功地构建了CDV磷蛋白基因的原核表达系统,获得了重组磷蛋白。