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实验一养阴润肠方对大黄构建慢传输便秘模型水通道蛋白AQP3/AQP8的影响 目的:观察养阴润肠方对大黄造模水通道蛋白的影响,探讨朱秉宜养阴润肠方的通便机制。 方法:随机将32只SD大鼠分为造模组(24只)及正常对照组(6只),正常对照组给予蒸馏水灌胃,造模组采用大黄递增灌胃法制作慢传输型便秘大鼠模型,造模成功后,大鼠随机分为大黄造模组、莫沙必利组、养阴润肠方组、自然恢复组。大黄造模组及正常对照组予以一期处死,并采用活性炭灌胃法检测结肠传输功能、观察结肠内存留粪便粒数、粪便含水量,实时荧光定量PCR法检测水通道蛋白在结肠上皮表达的变化。其他组继续给予相应干预措施干预30 d,之后检测上述指标。 结果:大黄造模组结肠内存留粪便粒数较正常组多(P<0.01),养阴润肠方组及莫沙必利组结肠内存留粪便粒数较大黄造模组少(P<0.01);大黄造模组较正常组碳末推进率明显降低(P<0.01),与大黄造模组比较,莫沙必利组及养阴润肠方组碳末推进率明显升高(P<0.01),而自然恢复组与大黄造模组比较,没有统计学意义(P>0.05); AQP3在远端结肠表达远高于近端结肠(F=2.44,p=0.009),养阴润肠组,莫沙必利组AQP3表达降低,不能恢复至正常水平,较正常组相比,统计学有差异(养阴润肠组p=0.020,莫沙必利组p=0.014)。研究还发现AQP8在结肠近端表达较为敏感,大黄造模成功后,使用中药干预和西药干预AQP8均下降明显,与模型组相比,统计学有意义(P=0.017,P=0.000)。 实验二洛哌丁胺构建大鼠便秘模型对水通道蛋白AQP3/AQP8的影响 目的:观察AQP3,8(水通道蛋白家族)蛋白表达及mRNA表达在洛哌丁胺构建大鼠便秘模型中的表达差异,探讨其与便秘的关系。 方法:SD雄性大鼠30只,随机分为5组,造模开始时处死一组大鼠,测肠道传输功能及结肠组织的AQP3,8表达水平,作为基准参考线。予以洛哌丁胺3mg/kg/d灌胃,诱导造模,灌胃后第3、7天处死一组大鼠,体外检测肠道传输及AQP3,8蛋白表达,然后予以停药,停药后第3、7天再次检测,分别处死剩余两组大鼠,检测相关指标,观察造模成功后,未予任何干预,便秘大鼠的AQP3,8的表达变化。 结果:大鼠粪便含水量在诱导便秘模型的过程中明显减少,与正常组相比,差异有统计学意义(P=0.022),停药后7d,粪便内的水分并不能自发恢复至正常(P=0.01).试验过程中,大鼠结肠传输功能未发生改变(P=0.971).AQP8远端表达停药7天上升,与造模7d时相比,差异有统计学意义(P=0.008).AQP8近端表达给药后迅速上升至较高水平,与正常组对照具有统计学意义(P=0.00),停药7d后其表达再次上升,差异有统计学意义(P=0.015).停药后,AQP3在结肠近端持续表达下降,与正常对照组相比,差异有统计学意义(P=0.04)。 结论:洛哌丁胺能够提高模型大鼠结肠AQP8表达,促进肠道跨膜水运输,减少粪便含水量而导致便秘。