【摘 要】
：
目的:通过5/6（ablation/infarction,A/I）慢性肾衰大鼠肾内缺氧的角度研究线粒体凋亡途径和P53的活化及肾衰Ⅱ号方的干预作用,探索肾衰Ⅱ号方抑制细胞凋亡和改善肾间质纤维化的作用机制。方法:65只SD雄性大鼠按5/6（A/I）法制备慢性肾衰大鼠模型。30日后,将造模成功的大鼠随机分为三组:模型组、中药组（肾衰Ⅱ号方）和西药组（氯沙坦钾）,每组15只。另取15只大鼠为假手术组。干
【基金项目】
：
国家自然科学基金（NO.81573946）:缺氧诱马慢性肾衰大鼠肾脏线粒体自噬与凋亡的机制及肾衰Ⅱ方的干预作用；
论文部分内容阅读
目的:通过5/6（ablation/infarction,A/I）慢性肾衰大鼠肾内缺氧的角度研究线粒体凋亡途径和P53的活化及肾衰Ⅱ号方的干预作用,探索肾衰Ⅱ号方抑制细胞凋亡和改善肾间质纤维化的作用机制。方法:65只SD雄性大鼠按5/6（A/I）法制备慢性肾衰大鼠模型。30日后,将造模成功的大鼠随机分为三组:模型组、中药组（肾衰Ⅱ号方）和西药组（氯沙坦钾）,每组15只。另取15只大鼠为假手术组。干预60天后,检测指标如下:1、收集24小时尿液和血清进行肾功能的检测;收集残余肾组织Western blot法进行肾纤维化标志性蛋白FN、Col-Ⅰ和α-SMA的检测;免疫组织化学染色进行E-cadherin和α-SMA蛋白表达的检测;HE、PAS和Masson染色进行肾组织病理检测;2、应用周围血管超声波血流和钠重吸收的氧耗评估肾血流及肾内氧耗水平;Western blot和免疫组织化学检测缺氧标志性蛋白HIF-1α的表达;3、Tunel和Hoechst 33342染色检测细胞凋亡水平;Western blot、免疫组织化学和Real-time PCR检测caspase3及自噬相关性蛋白Beclin1和Lc3的表达;将残余肾组织细胞质组分和线粒体组分分离通过Western blot法检测细胞质及线粒体细胞色素C的水平,检测线粒体Bax、Bcl2和Puma蛋白的水平;Real-time PCR检测线粒体拷贝数水平;透射电镜观察线粒体超微结构;4、收集残余肾组织将细胞核和线粒体提取,Western blot法分别检测P53的核转位和线粒体转位;Real-time PCR检测P53靶基因Bax、Puma和Noxa m RNA的水平;免疫共沉淀及Western blot法检测P53与Bcl2和Bcl-x L的相互作用水平。结果:1、造模30日后,与假手术组相比,接受5/6（A/I）术大鼠血尿酸（UA）、血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、24小时尿蛋白（24h Pro）水平显著升高,说明造模成功。干预60天后,与模型组相比,肾衰Ⅱ号方能够显著改善肾功能和降低24小时尿蛋白水平,降低FN、Col-Ⅰ和α-SMA蛋白表达,升高E-cadherin蛋白表达,改善肾损伤和肾间质纤维化。2、与假手术组相比,模型组肾内血流降低,肾氧耗增加;与模型组相比,肾衰Ⅱ号方可显著增加5/6（A/I）大鼠肾血流,改善肾内氧耗,下调HIF-1α蛋白的表达。3、Tunel和Hoechst 33342染色显示肾衰Ⅱ号方可明显减少5/6（A/I）大鼠细胞凋亡水平和改善细胞核形态。肾衰Ⅱ号方可明显降低Cleaved-caspase9、Cleaved-parp、Cleaved-caspase3凋亡标志性蛋白的水平,抑制caspase3活性,上调Beclin1的表达和Lc3-Ⅱ/Lc3-Ⅰ的比值。进一步研究发现,肾衰Ⅱ号方可明显改善线粒体功能和形态结构,减少促凋亡蛋白Bax和Puma向线粒体聚积,稳定线粒体抗凋亡蛋白Bcl2的水平,降低Bax/Bcl2的比值,抑制细胞色素C从线粒体向细胞浆的释放。4、肾衰Ⅱ号方可明显抑制P53的核转位和线粒体转位,抑制P53的活化和转录激活,抑制P53和抗凋亡蛋白Bcl2及Bcl-x L之间的相互作用,抑制线粒体凋亡途径。结论:肾衰Ⅱ号方可改善5/6（A/I）慢性肾衰大鼠肾内缺氧,减轻肾损伤及肾间质纤维化,其机制可能与改善肾内缺氧以抑制线粒体凋亡途径和线粒体功能改善有关。再者,P53诱导的靶基因激活及P53转录非依赖的促凋亡方式可能参与了线粒体凋亡途径,而肾衰Ⅱ号方可以明显抑制P53转录依赖与非依赖的促凋亡功能,这可能是肾衰Ⅱ号方抑制线粒体凋亡途径的机制之一。
其他文献
＜正＞目的:评价绝经期前妇女骨密度（bone mineral density,BMD）和骨矿盐含量（bone mineral content,BMC）与常见心血管疾病危险因素[血脂、空腹血糖（fasting bloodglucose,FBG）、血压（blood pressure,BP）]之间的关系。方法:公开招募185名既往健康的、年龄在30-55岁之间的未绝经妇女志愿者;测定血清TC、LDL-C
目的:课题组前期研究提示健脾清化方通过增加骨骼肌细胞中的4型葡萄糖转运体（Glucose Transporter Type 4,GLUT4）蛋白表达提高骨骼肌组织的葡萄糖利用,从而改善骨骼肌胰岛素抵抗。文献提示,骨骼肌脂肪异位沉积是引起骨骼肌胰岛素抵抗的重要原因,本研究主要观察中药对骨骼肌脂肪异位沉积的影响,及其可能的机制。方法:本研究分体内实验和体外实验两部分。体内实验以C57小鼠为研究对象。除
目的:总结分析曹永清教授治疗功能性便秘用药经验,验证基础方“朴实方”的临床有效性和安全性,探索其可能存在的作用机理。方法:第一章,收录2007年1月至2017年12月在曹永清教授专科门诊接受治疗的便秘患者的病历,录入“中医传承辅助系统（V2.5）”,对其处方规则和中药使用特点进行总结分析。第二章,收集整理2018年1月1日至2019年12月30日诊断为功能性便秘且同时接受朴实方基础方加减治疗的68
目的:骨质疏松症是最常见的老年性疾病,随着我国人口老龄化趋势加剧,该病的预防成为公共卫生和医疗领域研究的热点。本研究通过在中国上海市、北京市、广东省、甘肃省、吉林省五个地区建立开展流行病研究,调查骨质疏松症的患病率,分析其危险因素,探讨中医体质对骨质疏松的影响,以期为中医“治未病”预防骨质疏松症提供科学依据。方法:1.计算机检索Cochrane Library、Pub Med、EMbase以及中国
目的:通过实验及临床研究,观察益气扶正法治疗三阴性乳腺癌,在增强顺铂（DDP）耐药细胞株对顺铂敏感性、对患者总生存时间影响等方面的作用,并于lncRNA层面探讨益气扶正法治疗三阴性乳腺癌的作用机制,为益气扶正法治疗三阴性乳腺癌的临床实践提供依据。方法:1.鉴定三阴性乳腺癌顺铂耐药细胞株MDA-MB-231/DDP的耐药性。2.检测三阴性乳腺癌顺铂耐药细胞株MDA-MB-231/DDP和亲本细胞株M
目的:通过进行随机对照试验,验证电针治疗膝骨关节炎的有效性,为临床提供循证数据。明确电针缓解KOA疼痛、改善膝关节活动度效果,提高KOA患者的生活和工作质量,延缓KOA的病理发展程度。选用前交叉韧带损伤模型小鼠进行体外实验,探索电针治疗膝骨关节炎的疗效机制。方法:1.电针治疗膝骨关节炎多中心临床研究根据多中心、随机、单盲的原则,纳入300例符合膝骨关节炎标准患者,进行随机分组,分为针刺组和假针组,
目的:复发转移是胃癌术后患者死亡的主要原因。前期研究提示健脾复方胃肠安可通过调控RUN和FYVE结构域蛋白3（RUN and FYVE domain containing 3,RUFY3）的表达来影响胃癌的侵袭转移而发挥抗肿瘤作用。但胃肠安干预后胃癌细胞中RUFY3的表达与抑制胃癌细胞侵袭转移的内在关联性和分子机制仍不明确。本研究旨在明确RUFY3在胃癌中的临床意义及其在胃癌侵袭转移和上皮间质转化
目的:依据大数据挖掘及芯片检测技术,结合临床队列试验、动物体内实验及细胞体外实验,由面到点、逐层递进地探索“风寒湿（Fenghanshi,FHS）”外部因素影响膝骨关节炎（Knee Osteoarthritis,KOA）进展及桂枝汤（Guizhi Tang,GZT）的干预机制研究。方法:1)首先基于FHS队列（2015年2-11月来自上海中医药大学附属曙光医院的KOA患者,n=110）进行气象数据