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食管癌（esophageal carcinoma，EC）是我国常见的恶性肿瘤之一，发病率位居男性肿瘤第4位（22.9/10万）和女性肿瘤第8位（10.5/10万）。近年来世界范围内每年新增病例30余万，其中中国发病人数15万[1]，且多为食管鳞状细胞癌（esophagealsquamous cell carcinoma，ESCC）。早期食管癌患者经手术或放射治疗，5年生存率可高达90%以上，而中晚期患者术后5年的生存率仅为10%左右[2]。因此，有效筛查高危易感人群、及时诊断并早期治疗，是提高治愈、降低食管癌患者死亡率的关键所在。食管癌发病隐匿，患者早期无明显特异性症状，尽管内镜检查、黏膜活检和PET-CT是发现早期癌和癌前病变有效的手段和方法，但都不适合应用于大面积人群的早期筛查。肿瘤标志物（tumor marker，TM）检测因其简便、经济、快速、重复性高等优点，已成为临床使用的一项重要辅助检查手段。近年来许多研究者在积极寻找食管癌特异的血清标志物，虽然p53抗体、鳞状上皮细胞癌相关抗原（squamouscell carcinoma associated antigen，SCCA）、癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）、细胞角化素蛋白-19的可溶性片段（CYFRA21-1）等，在食管癌患者血清中的表达较正常对照组明显增高，但这4种标志物用于诊断早期食管癌的敏感性（60%、26.8%、17%和43.0%）和特异性（31%、73%、22%和53%）均不高[3,4]。因此，我们的课题研究试图寻找食管癌敏感性和特异性较高的血清标志物，并验证其对早期诊断的价值。肿瘤睾丸抗原（cancer testis antigen，CTA）是一类具有特异性表达模式的肿瘤相关抗原（tumor-associated antigen，TAA），它在多种组织来源的肿瘤组织、生殖细胞和胎盘的滋养层细胞中表达。由于血-睾丸屏障的存在，阻断了白细胞与生殖细胞的接触，且生殖细胞表面缺乏Ⅰ类人类白细胞抗原（human leukocyte antigenⅠ，HLA-1）分子表达，因而表达CTA的生殖细胞不会诱导体内发生免疫应答[5]，而肿瘤组织可以特异性地表达CTA，在患者体内诱导特异性的免疫应答，因此，CTA已成为肿瘤早期诊断分子标志物筛选的首选目标。淋巴细胞抗原6-复合体K（lymphocyte antigen6Complex Locus K，LY6K）、黑色素瘤抗原基因-A3（melanoma antigen family A,3，MAGE-A3）和胰岛素类生长因子2的mRNA结合蛋白3（insulin-like growth factor2mRNA binding protein3，IGF2BP3）均为CTA亚家族成员，有研究显示，MAGE-A3在食管鳞癌组织中表达率为62.9%[5]，LY6K和IGF2BP3在食管鳞癌组织中的表达率均大于90%[6]，且在正常食管粘膜中均未检测到表达。这三种蛋白在食管鳞癌组织中的表达率均较高，且以食管鳞癌和LY6K、MAGE-A3、IGF2BP3为联合研究对象关于早期诊断的研究在先前的文献中未见报道，因此，我们拟表达纯化LY6K、MAGE-A3和IGF2BP3蛋白，并检测食管鳞癌患者和正常对照者血清中LY6K、MAGE-A3和IGF2BP3三种蛋白的抗体水平，对其在食管鳞癌早期血清学诊断方面的价值进行评价。方法：1、设计引物和酶切位点，合成目的基因LY6K、MAGE-A3和IGF2BP3；2、将目的基因与相应原核表达载体连接后转入大肠杆菌，经IPTG诱导表达后行可溶性分析，Western Blot鉴定蛋白特异性，亲和层析法纯化重组蛋白；3、将纯化的重组蛋白作为抗原，通过间接ELISA法对59例未经任何治疗的食管鳞癌患者及50例正常体检者血清中三种蛋白的抗体水平进行检测。结果：1、成功表达纯化得到重组蛋白LY6K、MAGE-A3和IGF2BP3；2、食管鳞癌组三种蛋白的抗体水平均高于正常对照组，经Mann-Whitney U检验分析，差异具有统计学意义；3、对检测数据（OD450nm值）进行逻辑回归分析，结果显示：LY6K-Ab、MAGE-A3-Ab以及IGF2BP3-Ab单独用于食管鳞癌的临床诊断敏感性和特异性分别为76.2%和71.8%（cutoff值=0.396）、56.0%和45.3%（cutoff值=0.414）和55.7%和35.0%（cutoff值=0.377），且三者在95%的置信水平时AUC分别为0.835、0.548和0.502。三者联合检测用于食管鳞癌的临床诊断敏感性为78.3%，特异性为76.0%（cutoff值=0.401），95%的置信水平时AUC为0.856。结论：重组蛋白LY6K、MAGE-A3和IGF2BP3可作为食管鳞癌早期免疫筛检和诊断的备选抗原。单独检测MAGE-A3-Ab和IGF2BP3-Ab对食管鳞癌诊断的准确性较低；单独检测LY6K-Ab对食管鳞癌诊断具有相对高的准确性；联合检测LY6K-Ab、MAGE-A3-Ab和IGF2BP3-Ab的诊断效果与分别单独检测比较，准确性最高。