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研究目的:
1.检测IgAN患儿外周血CD62P和CD44的水平及肾组织中CD62P和CD44的表达,探讨CD62P和CD44在儿童IgAN发生中的作用及临床意义。
2.研究IgAN患儿肾组织CD62P和CD44表达与肾小管间质损害之间的关系,探讨CD62P和CD44在IgAN患儿肾小管间质损害中的作用。
材料和方法:
1.CD62P和CD44在IgAN患儿外周血中的水平
1.1临床资料2005年3月~8月在中山大学附属第一医院儿童肾病中心住院的活动期IgAN患儿32例。所有病例均经肾活检(光镜、免疫荧光、电镜)证实为IgAN,并排除继发性IgAN。其中男27例,女5例,年龄4岁5个月~13岁8个月,中位年龄9岁7个月。起病到确诊IgAN病程0.7月~80.0月,中位病程3.0月。同期本院健康体检儿童15例设为对照组,年龄、性别与病例组相匹配。
参照2001年中华医学会儿科学分会肾脏病学组制定的标准,将病例组IgAN患儿按临床表现分为三组:孤立性血尿组13例;血尿蛋白尿组9例;肾病综合征组10例。按1982年WHO病理分级标准进行分级,将不同病理分级IgAN患儿合并后分为三组:病理Ⅰ+Ⅱ级组13例;病理Ⅲ级组10例;病理Ⅳ级组9例。
1.2研究方法1.2.1血浆CD62P水平的检测:采用双抗体夹心、固相免疫放射法(RIA)。
1.2.2血清CD44水平的检测:采用酶联免疫吸附法(ELISA)。
1.2.3其他检测项目(1)24小时尿蛋白定量:用磺基水杨酸法检测。
(2)血清生化指标:血清白蛋白(ALB)、胆固醇(CHOL)、尿素氮(BUN)和肌酐(Cr),用7170A全自动生化分析仪检测。
(3)尿N-乙酰-氨基葡萄糖苷酶(NAG):用PNP显色法;尿β2微球蛋白(β2-MG):用同位素放免法;尿溶菌酶(Lys):用平板琼脂法。
(4)血小板计数:用东亚KX-21多项目自动血球计数仪检测。
1.3统计学分析应用SPSS10.0软件进行分析。各组数据以均数±标准差(x±s)表示;多组均数比较采用单因素方差分析(one-wayANOVA),其中两两间均数比较采用最小显著(LSD)法;相关性分析采用Pearson相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。2.CD62P和CD44在IgAN患儿肾组织中的表达
2.1临床资料2004年1月~2005年9月在中山大学附属第一医院儿童肾病中心住院,并经肾活检(光镜、免疫荧光、电镜)证实为IgAN的患儿共46例,均排除继发性IgAN。其中男37例,女9例。年龄4岁1个月~14岁2个月,中位年龄9岁。起病到确诊IgAN病程0.5月~96月,中位病程4.0月。所有病例处于病情活动期。肾活检正常对照组4例,为肾移植术前健康配型不合供肾组织1例及肾肿瘤切除术远离肿瘤组织的肾组织3例。
临床分型标准同前,将病例组IgAN患儿按临床表现分为三组:孤立性血尿组14例;血尿蛋白尿组17例;肾病综合征组15例。病理分级标准同前,将不同病理分级IgAN患儿合并后分为三组:病理Ⅰ+Ⅱ级组23例;Ⅲ级组14例;Ⅳ级组9例。
2.2研究方法2.2.1肾组织CD62P的表达采用免疫组化SP法(Streptavidin-peroxidasebiotin)。操作按试剂盒说明。根据肾组织中染色阳性细胞占该类细胞的比例进行双盲打分(半定量分析法):阴性(-):阳性染色细胞<5%;阳性(+):阳性细胞<25%;(++):阳性细胞约25%~50%;(+++):阳性细胞>50%。
2.2.2肾组织CD44的表达采用免疫组化SP法检测。操作按试剂盒说明。判断表达强度的方法同2.2.1。2.2.3肾小管间质病变的分度根据肾皮质区的肾小管萎缩、间质炎细胞浸润和纤维化情况,将肾小管间质病变程度分为:轻度损害(累及<20%);中度损害(累及20%~50%);重度损害(累及>50%)。
2.3统计学分析应用SPSS10.0软件进行分析。三组患儿肾小球、肾小管和肾间质CD62P和CD44表达强度的比较采用等级资料的秩和检验;表达阳性率之间的比较采用x2检验;肾小管和肾间质CD62P和CD44表达与肾小管间质病变的相关性采用Spearman等级相关分析。P<0.05为差异有统计学意义。
结论:
1.在正常肾组织中,CD62P仅在血管内皮细胞表达,CD44仅表达于少数肾间质成纤维细胞。而在IgAN患儿肾组织中,CD62P在肾小管上皮细胞显著表达,CD44在肾小球、肾小管和肾间质均有表达。
2.IgAN患儿外周血和肾组织CD62P和CD44的表达均较对照组明显增高,不同临床表现组中,肾病综合征组最高,孤立性血尿组最低,且与IgAN患儿的病理分级密切相关,提示CD62P和CD44参与了儿童IgAN的发生,外周血CD62P和CD44水平可作为判断IgAN严重程度的指标。
3.IgAN患儿外周血CD62P和CD44水平与24小时尿蛋白定量、血CHOL呈正相关,与血ALB呈负相关,提示CD62P和CD44可能参与了IgAN忠儿蛋白尿的发生。
4.IgAN患儿外周血CD62P和CD44水平与尿NAG、尿β2-MG呈正相关,肾组织CD62P和CD44的表达与肾小管间质损害程度呈正相关,提示CD62P和CD44参与了IgAN患儿的肾小管间质损害,与IgAN的进展及预后有关。
5.IgAN患儿外周血CD62P和CD44水平呈正相关,提示CD62P和CD44在儿童IgAN的发生过程中可能有协同或相加作用。