论文部分内容阅读
黑果悬钩子(Rubus caesius L.)为新疆特有的可食悬钩子属植物,又称欧洲木莓,在新疆北疆分布广泛,对其化学成分和生物活性的研究鲜有报道。本文对黑果悬钩子茎、叶的化学成分和生物活性进行研究,以期从中发现高活性的化合物。首先,通过有机溶剂提取、分步萃取的方法制备了黑果悬钩子茎和叶的乙酸乙酯、正丁醇和水部位,测定了不同部位的总黄酮含量、抗氧化活性、蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)活性抑制、及3T3-L1前脂肪细胞活性抑制。结果表明:茎和叶中均具有较高的总黄酮含量,茎的总黄酮含量高于叶的总黄酮含量,其中茎乙酸乙酯部位的总黄酮含量最高,为685.65±11.43mg/ml。黑果悬钩子茎和叶均表现出了较高的抗氧化活性,它们的总黄酮含量越高其抗氧化能力也相应较高。黑果悬钩子茎和叶各部位均对PTP1B具有良好的抑制作用,其中茎的水部位和叶的乙酸乙酯部位对PTP1B的抑制活性最好,其IC50值分别达到0.08±0.01μg/ml和0.16±0.06μg/ml,均低于阳性对照物矾酸钠。黑果悬钩子茎和叶各部位对3T3-L1前脂肪细胞均有较好的抑制作用,其中茎乙酸乙酯部位、茎水部位、叶水部位的效果尤为明显,抑制率最高可达到75%以上。利用不同溶剂、乙醇体积分数、提取温度、提取时间、料液比等单因素试验和正交试验优化得到黑果悬钩子茎和叶总黄酮和多酚的最佳提取工艺为:乙醇体积分数60%、温度80℃、时间70 min、料液比1∶90(g/m L)。在此优化条件下茎和叶总黄酮提取量分别达到10.51±0.27mg/g和16.32±0.44mg/g,多酚提取量分别达到76.28±1.46mg/g和134.65±5.77mg/g。通过对AB-8等14种大孔树脂对茎、叶总黄酮的吸附分离效果的比较,筛选出AB-8大孔树脂是最理想的吸附剂,通过静态吸附时间、乙醇体积分数对总黄酮的静态解吸、上样流速、上样体积、洗脱流速、洗脱体积等单因素的测定,确定了总黄酮纯化的最优工艺为:上样液总黄酮质量浓度0.32 mg/m L、上样流速1 m L/min、上样体积80 m L,在吸附饱和平衡后动态洗脱的条件为1.5 m L/min的流速、40 m L 60%乙醇溶液。经过AB-8纯化后,叶和茎提取液的总黄酮含量和抗氧化能力显著提高,叶和茎总黄酮含量分别为纯化前的1.4倍和2.4倍,叶和茎的的ABTS+·清除能力为纯化前的1.7倍和2.5倍,DPPH自由基清除能力为纯化前的1.7倍和2.6倍。对活性较高的黑果悬钩子茎、叶乙酸乙酯部位进行分离纯化,利用液-液萃取法、减压硅胶柱色谱、常压硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、HPLC半制备色谱等手段进行分离,并通过颜色、状态等理化性质和质谱、核磁共振、氢谱、碳谱等波谱方法鉴定了5个化合物。这些化合物都是首次从该植物中分离得到,分别是:异槲皮苷、柚皮苷、金丝桃苷、(-)-epicatechin 3-O-gallate(ECG)和类叶升麻苷。上述研究结果表明:黑果悬钩子叶和茎均具有较高的总黄酮、多酚含量和明显的抗氧化活性,是潜在的天然抗氧化剂资源。茎和叶各萃取部位对PTP1B和3T3-L1前脂肪细胞具有较好的抑制活性,通过对其化合物的分离纯化、结构鉴定,将为今后开发利用基于黑果悬钩子的降血糖植物药提供科学依据。