近年来,食品安全问题日益严重,药物的违规使用严重的威胁人类的身体健康。继“瘦肉精”盐酸克仑特罗的禁用,新型“瘦肉精”赛庚啶的违法使用问题显现,造成新的食品安全问题。赛庚啶是一种人用抗过敏处方药,在动物饲料中的违法使用,可以起到类似“瘦肉精”盐酸克仑特罗的效果,被誉为新型“瘦肉精”。以儿童与老人为最敏感人群,高浓度的赛庚啶会导致昏迷甚至死亡。因此,国内外均严禁赛庚啶等人药的兽用,中国农业部也于2010年12月27日发布1519号公告,严禁在饲料和动物饮水中使用赛庚啶。基于抗体的免疫学检测技术具有灵敏高、特异强、快速、简便的优点,具有现场快速实时定性、高通量筛查的优势,已广泛应用于药物残留检测。而对于新型“瘦肉精”赛庚啶尚无免疫学检测方法的报道,作为动物检验检疫的重要方法和手段,研发赛庚啶免疫检测技术具有重要的意义。本研究以赛庚啶为研究对象,通过结构改造,人工合成半抗原,免疫动物后制备多克隆抗体、单克隆抗体,建立免疫检测方法。研究结果如下:1.半抗原的改造和人工抗原的合成:本实验成功合成了赛庚啶人工半抗原,2-甲基-4-(5H-二苯并[a,d]环庚三烯-5-亚基)哌啶乙酸。并采用核磁氢谱和质谱对其结构进行验证,将赛庚啶半抗原分别与三种载体蛋白KLH、BSA和OVA进行偶联,成功制备得到两种完全抗原CYP-KLH和CYP-BSA,以及包被原CYP-OVA。2.多克隆抗体的制备与间接竞争ELISA方法的建立:用赛庚啶人工抗原CYP-BSA进行小鼠免疫得到的多抗血清效价约为10000以上,1号小鼠为64000-128000倍之间,2号小鼠为128000倍,3号小鼠为32000-64000倍之间,多抗血清对赛庚啶的半数抑制率IC50,1号鼠为0.02μg/mL,2号鼠为93.95μg/m L,3号鼠为2.53μg/m L,多抗血清对赛庚啶半抗原的IC50,1号鼠为0.032μg/mL,2号鼠为1.61μg/m L,3号鼠为0.492μg/mL,多抗血清的交叉反应率,1号鼠为160%,2号鼠为1.71%,3号鼠为19.4%;用赛庚啶人工抗原CYP-KLH进行小鼠免疫得到的多抗血清效价,1号小鼠为16000倍,2号小鼠为8000-16000倍之间,3号小鼠为8000-16000倍之间,多抗血清对赛庚啶的半数抑制率IC50,1号鼠为2.685μg/m L,2号鼠为2.328μg/m L,3号鼠为2.999μg/mL,多抗血清对赛庚啶半抗原的IC50,1号鼠为0.242μg/m L,2号鼠为0.261μg/mL,1号鼠为0.132μg/m L,多抗血清的交叉反应率,1号鼠为9.01%,2号鼠为11.2%,3号鼠为4.40%。3.单克隆抗体的制备与性质分析:通过PEG将小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合制备杂交瘤细胞。细胞融合率在25%-30%之间。细胞融合后一周,用间接法检测6块96孔细胞培养板的上清液,共获得58个阳性孔。通过对杂交瘤细胞的筛选和亚克隆,未能获得稳定分泌抗赛庚啶药单克隆抗体的杂交瘤细胞株。