PDTC、顺铂对非小细胞肺癌A549细胞增殖和凋亡作用的体外研究

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目的研究吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)、顺铂(DDP)对非小细胞肺癌A549细胞增殖及凋亡的作用,以及与Bcl-2、Bax及NF-kB表达的关系。方法不同药物浓度PDTC、DDP及PDTC联合DDP作用48h后,倒置显微镜下直接观察各组给药后细胞形态学的变化,HE染色后光学显微镜下观察各组给药后细胞形态学的变化;MTT法测试PDTC、DDP及PDTC联合DDP对非小细胞肺癌A549细胞的细胞毒性并观察是否存在剂量和时间依赖性;免疫组化法观察PDTC、DDP及PDTC联合DDP对非小细胞肺癌A549细胞中凋亡蛋白Bcl-2、Bax及NF-kB的表达变化情况。结果1. PDTC、DDP及PDTC联合DDP对A549细胞凋亡的影响:不同药物浓度(PDTC、DDP、PDTC+DDP)作用细胞48小时后,倒置显微镜下见:A549细胞随药物浓度的增高,细胞密度降低,贴壁能力变差,部分细胞变圆、皱缩并漂浮于培养液中;经HE染色后光学显微镜下可见:A549细胞随药物浓度的增高,细胞存留密度降低,细胞形态改变,核浆比重减小,出现细胞皱缩,核膜裂解,染色质浓缩,最终出现凋亡细胞。2.PDTC、DDP及PDTC联合DDP对A549细胞增殖的影响:(1).不同药物浓度的PDTC、DDP及PDTC+DDP对A549细胞增殖都有抑制作用,并随着时间延长及浓度的升高,增殖抑制率分别从3.12%增加到36.18%,从3.54%增加到39.91%,及从12.19%增长到63.3%,存在时间及浓度依赖关系;而且各药物作用组分别与对照组相比,对A549细胞生长抑制作用的差异都有统计学意义(P<0.05)。(2)作用48h时,药物组PDTC、DDP及PDTC+DDP对A549细胞的增殖抑制率分别为8.89%、16.41%、19.58%、30.64%,5.3%、14.74%、24.39%、39.51和13.33%、25.13%、39.85%、58.5%,前二组与PDTC+DDP组间的差异都有统计学意义(P<0.05),Q值大于1.15,表示PDTC+DDP联合作用于A549细胞有协同作用。3. PDTC、DDP及PDTC联合DDP对A549细胞免疫组化蛋白的表达:PDTC、DDP及PDTC联合DDP下不同浓度随着浓度的增加,NF-kBp65蛋白表达减少,抗凋亡蛋白Bal-2表达减少,促凋亡蛋白Bax表达增强。结论1.PDTC、DDP及PDTC联合DDP对A549细胞生长有抑制作用,并促进其凋亡,呈时间-剂量依赖关系;2.PDTC与DDP联合可协同作用于A549细胞,抑制细胞的增殖并促进细胞的凋亡;3.进一步证实,PDTC能通过NF-κBp65抑制蛋白,抑制抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达,从而促进细胞凋亡过程,PDTC可促进DDP化疗效果。
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