多粘菌素E是由多粘杆菌(Paenibacillus Polymyxa)所产生的,由多种氨基酸和脂肪酸所组成的一族碱性多肽类抗生素中的一种,它对各种革兰氏阴性菌引起的疾病有显著疗效。本论文对多粘菌素E产生菌的高通量诱变育种及发酵生产进行了系统的研究,并取得了良好效果。 建立了多粘菌素E的液相色谱检测法(HPLC)。通过对流动相中乙腈含量和pH大小及检测波长等因素的优化,多粘菌素E的两种主要成分多粘菌素E1和多粘菌素E2得到很好的分离。 从原始培养基出发,分别对种子培养和发酵培养过程中的培养基及培养条件进行优化。在此实验条件下获得多粘菌素E产量达到500 mg/L,比优化前提高了17%。 建立了基于96微孔板的多粘菌素E产生菌高通量培养方法。优化了96微孔板装液量、摇床转速等培养条件。自行设计了8层纱布外加有孔聚酯盖子的方法代替微孔板原始盖子。以上培养体系水份蒸发率只有2%,无交叉污染现象,且与摇瓶培养体系具有良好的正相关性。 建立了96微孔板的多粘菌素E高通量检测方法。以大肠杆菌JM109为检定菌,以发酵液对检定菌的抑菌活性来确定多粘菌素E的含量。优化了初始大肠杆菌悬液浓度、培养时间、样品加入量等操作条件。研究了以上所建立的高通量测定方法与HPLC方法的联系,证实了两者具有一定的正相关性。 根据多粘菌素E生物合成途径,对多粘菌素E野生型产生菌进行推理选育。通过对13,613个突变株的高通量筛选,得到一株摇瓶发酵产量最高为1,200 mg/L的菌株(N6-557),为出发菌株产量的2.4倍。