结肠癌细胞内吞活动中癌基因产物cortactin的作用研究

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目的:探讨癌基因EMS1表达产物皮层蛋白(Cortactin)与结肠癌细胞内吞运动的关系。方法:1.通过共聚焦显微镜检测人结肠癌HT29细胞内Cortactin与内吞过程功能蛋白Rab5及Rab11的分布情况。2.通过共聚焦显微镜检测人结肠癌HT29细胞内Cortactin与组成性内吞标记转铁蛋白(Tfn)的关系。3.将人结肠癌HT29细胞分成四组:WT组为转染了表达全长Cortactin质粒的细胞、ND组为转染了Cortactin氨基端缺失质粒的细胞、SD组为转染了Cortactin羧基端缺失质粒的细胞、MGIN组为转染了空载体的细胞即对照组,通过共聚焦显微镜检测和ELISA法观察转染后对细胞内吞活动的影响。4.采用免疫荧光方法检测Cortactin磷酸化与Tfn内吞的关系。结果:1. Cortactin与内吞功能蛋白Rab5、Rab11在人结肠癌HT29细胞内共定位。2. Cortactin与组成性内吞标记Tfn在人结肠癌HT29细胞内共定位。3. ND组和SD组与MGIN组相比,细胞的内吞活动受到削弱,而WT组与MGIN组相比未受明显影响。4. Cortactin的磷酸化水平与Tfn内吞剂量呈现依赖关系。结论:Cortactin在人结肠癌细胞的内吞活动中发挥作用,其功能的发挥可能依赖其氨基端和羧基端结构区域。在内吞过程中,皮层蛋白发生磷酸化。
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