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研究背景新生隐球菌是一种机会致病真菌,主要感染免疫缺陷人群,如AIDS/HIV患者、肿瘤病人和长期使用免疫抑制剂的群体。新生隐球菌菌体或孢子通常经呼吸道进入患者体内,造成肺部原发感染,进而通过血脑屏障进入中枢神经系统,引起致命性隐球菌性脑膜炎。机体感染隐球菌的结局极大程度上取决于机体的免疫状态,Th1免疫反应占主要时可清除隐球菌。肺巨噬细胞是机体抵御隐球菌的第一类免疫细胞,可通过内吞和氧化杀伤方式在第一时间抵抗入侵的隐球菌,同时巨噬细胞也是连接固有免疫和适应性免疫的关键环节,可募集T细胞至感染灶,形成细胞因子微环境,进而调控后续的获得性免疫反应。巨噬细胞在机体抗新生隐球菌免疫反应中扮演重要角色。转化生长因子(TGF-β)是一种多效细胞因子,在调节免疫反应方面有重要作用,可影响免疫细胞增殖、分化及相应功能,诱导免疫耐受和影响Th1/Th2细胞平衡。本课题将研究TGF-β对巨噬细胞吞噬、杀伤功能的影响,以及在机体抗隐球菌免疫方面的作用。研究目的本课题旨在研究TGF-β对巨噬细胞功能的影响,以及TGF-β在机体抗隐球菌感染方面的作用。研究方法用重组小鼠TGF-β提前干预J774A.1巨噬细胞,随后用新生隐球菌感染巨噬细胞,观察巨噬细胞吞噬率的改变;予以TGF-β干预隐球菌感染后巨噬细胞,分别比较巨噬细胞内、外隐球菌菌落负荷在TGF-β干预后变化,用以评价巨噬细胞对胞内、外隐球菌杀伤能力;为进一步研究巨噬细胞杀伤能力改变,用溶菌酶试剂盒检测巨噬细胞溶菌酶的分泌量,用Griess reagent试剂盒检测巨噬细胞NO生成量,并比较TGF-β干预后二者生成量的变化;建立小鼠隐球菌吸入感染模型,将重组小鼠TGF-β经尾静脉注射干预小鼠,分两组在感染早期和晚期分别干预,观察小鼠生存曲线、肺、脑组织菌落负荷,以及肺、脑、外周血中Th1/Th2/Th17细胞因子浓度变化。结果TGF-β干预导致巨噬细胞吞噬率下降,而巨噬细胞NO生成量和溶菌酶分泌量均上升,对吞噬入胞内和胞外的隐球菌杀伤力均增加。在小鼠吸入感染模型,进行生存曲线分析,TGF-β早期干预组小鼠抵抗隐球菌能力减弱,死亡时间提前。此外,感染早期予TGF-β干预组,肺部菌落负荷增加,晚期隐球菌播散入脑数量增加,肺部IFN-γ、TNF-α浓度降低,IL-6浓度增高,脑组织和外周血Th细胞因子未见变化。感染后期予TGF-β干预小鼠组,肺部菌落下降,脑部隐球菌量无差异,肺组织中TNF-α和IL-6浓度升高,脑组织和外周血Th细胞因子亦未见变化。结论TGF-β抑制巨噬细胞吞噬隐球菌能力,但可通过增加溶菌酶和NO的生成量,提升巨噬细胞对隐球菌的杀伤能力。在小鼠吸入隐球菌感染模型,早期TGF-β干预将抑制巨噬细胞吞噬作用,进而抑制有效炎症反应,小鼠抵抗隐球菌能力下降,导致隐球菌播散,死亡时间提前。晚期TGF-β干预可提高巨噬细胞杀伤功能,同时可提高肺部TNF-α浓度,增强抗隐球菌能力,肺部菌落负荷量下降,有助于使感染局限化。