胸苷磷酸化酶(Thymidine phosphorylase，TP)、胸苷酸合成酶(Thymidylate synthase，TS) 和二氢嘧啶脱氢酶(dihydropyrimidine dehydrogenase，DPD)是细胞核酸代谢过程中起重要作用的三个酶，并且以不同的角度与5-FU相互作用而影响5-FU的疗效。TP可逆性地催化胸腺嘧啶核苷转变为2-脱氧核糖-1-磷酸和胸腺嘧啶，即通过催化胸苷和胸腺嘧啶的相互转化而稳定细胞内胸苷的水平。进入体内的5-FU需经过TP的作用被活化后才具有抗癌作用，TP还具有血管生成活性，与PD-ECGF是同一基因的转录产物。TS是合成胸苷酸的限速酶，催化dUMP转化为dTMP，而dTMP是DNA合成和修复所必须的胸腺嘧啶核苷酸的唯一来源，所以TS在细胞增生过程中发挥重要作用。TS也被证明是5-FU作用的靶向酶，5-FU就是通过抑制TS活性阻断DNA合成而发挥抗肿瘤的作用。DPD是尿嘧啶和胸腺嘧啶分解过程中的第一限速酶，可降低用于DNA合成的尿嘧啶和胸腺嘧啶的水平而影响DNA的合成。DPD同时也是降解5-Fu的最主要的限速酶，体内5一FU用量的85%由此酶降解。以往研究表明，肿瘤组织中TP、TS和DPD的表达与其相对应的正常组织存在一定的差别。鉴于三种酶在细胞代谢中的作用及与5一FU的关系，它们将影响肿瘤细胞的生物学特性、5一FU疗效和病人的预后。因此，揭示TP、TS和DPD在肿瘤组织中的表达规律、临床病理意义、5一FU化疗敏感性及与预后的关系将具有重要的理论意义和实用价值。迄今，人们对不同肿瘤中TP、TS和 DPD表达水平和临床价值尚未引起足够的认识。近期的研究多集中在结直肠癌，而对其它肿瘤的研究多为单指标观察。 乳腺癌是严重危害人类生命健康的常见恶性肿瘤之一，全球每年约有120余万妇女患乳腺癌，约50万妇女死于乳腺癌。其发病率在世界范围内呈较快增长趋势，每年约以2%以上的速度递增，因此，预防和控制乳腺癌意义重大，任务艰巨。目一前乳腺癌的治疗已从过去的以单一手术为主转变为全身的综合治疗，全身性治疗包括化疗和内分泌治疗等，此疗法不仅扩大了乳腺癌的手术适应征，而且一可使手术范围缩小，有利于病人的身心健康。虽然对乳腺癌的标准化治疗方案的研究己取得了可喜的进展，但乳腺癌总的疗效并没有显著的提高，因此，乳腺癌的个体化化疗在乳腺癌的治疗中具有取要地位。5一FU是乳腺癌化疗的基础药物，因此，有必要深入了解TP、TS和DPD与乳腺癌进展、治疗和预后的关系。到目前为止，该研究领域国内外的报道多为单指标的免疫组化观察，未见有关mRNA检测、mRNA和蛋白的对比分析及三个基因的联合检测。为此，本研究采用定量RT-PCR、半定量Rl飞PCR及免疫组化等方法，对比检测了北欧86例、中国93例乳腺癌肿瘤组织和正常乳腺组织中TP、TS、DPDn习民NA及蛋白表达水平，并探讨了它们与淋巴结转移、临床分期、肿瘤体积、组织学分级和生存状态等临床病理因素之间的关系，以阐明TP、TS和DPD在乳腺癌发展过程中的作用。同时对北欧及中国乳腺癌上述三个指标检测结果进行对比观察，从地理病理学角度进行了初步探讨。本研究共分以下3部分。第一部分北欧乳腺癌病人TP、TS、DPD mRNA和蛋白表达及其与临床病理、预后关系的研究 方法 1.应用real一time定量PCR的方法对经过“微选”的86例瑞典女性乳腺 癌标本和9例正常乳腺标本进行了TP、TS和DPD mRNA相对表达值检 测。 2.应用免疫组化技术以组织芯片的形式对上述标本进行了TP、TS和 DPD蛋白表达的检测。 3.应用流式细胞术检测了上述标本的s一PF(s一phase fraction)和DNA 倍体。 4.统计学处理应用SPSs 10.0 for windows统计软件包(sPss Ine.， cllicag。，usA)对所有资料进行统计学处理。采用了t检验、方差分析、 相关性检验和生存分析。显著性标准为p=0.05。 结果 1.乳腺癌组织和正常组织TP、TS和DPD mRNA水平变化幅度比较大，显示明显的个体差异。TP、TS平均水平高于正常组织，DPD低于正常组织，但这些差异均未达到统计学意义(P>0.05)。 2.乳腺癌组织中TP、TS和DPDmRNA的表达相互间无相关关系 (P>0.05)，各自呈独立变化。 3.乳腺癌组织中TP、TS和DPDn1RNA的表达水平与肿瘤体积、S一PF、DNA倍体、淋巴结转移、组织学分级、临床分期无关。TP和TS表达与年龄无关，而DPD mRNA水平与年龄呈负相关(P<0.05)。 4.TP和DPDmRNA表达与乳腺癌无瘤生存期、总生存期无相关性，低TS mRNA表达组无瘤生存期显示一个高于高表达组的趋势(P=0.069)，总生存期在高TS表达组和低TS表达组之间存在明显差异(P<0.05)。 5.免疫组化TP蛋白以核表达为主，TS呈胞浆表达，DPD阴性。TP、郑州大学20叫年博士研究生论文乳腺癌TP、Ts、D叩m旦压选es卫)里直鱼麦垫及甚与l喧床病理、预后关系的研究TS的阳性表达率分别为86.05%、75.58%。高表达率分别为50.00%、39.53%。 6.乳腺癌TP蛋白与TS蛋白表达之间无相关关系(P>0.05)。 7.TP、TS蛋白表达与肿瘤体积、DNA倍体、淋巴结转移、组织学分级、临床分期无关(P>0.05)。TS蛋白表达与S一期分数有关(P<0.05)。 8.TP蛋?