盐酸克伦特罗(Clenbuterol Hydrochloride,CL)是一种β-肾上腺素受体激动剂,因具有营养再分配、促进蛋白质合成、增加动物酮体瘦肉率、提高饲料转化率的作用,常常被非法作为饲料添加剂用于畜产品的生产,但其残留对人类健康存在潜在的危害,虽然被禁止在畜产品生产中使用,但是违法添加甚至造成消费者中毒的事件屡见不鲜。本文通过研制针对CL的单克隆抗体,初步建立了检测CL的间接竞争酶联免疫吸附法(ciELISA),在CL残留的快速筛检具有良好的特异性和敏感性。利用重氮法将CL小分子与载体蛋白OVA、BSA偶联,以CL-OVA为免疫原免疫Balb/c小鼠,以CL-BSA为检测原。采用杂交瘤技术获得4株(1A3、2B6、2F10、3F5)针对CL的单克隆抗体细胞株。实验表明,ELISA试验时1A3细胞上清受溶液介质的影响较小,只与CL反应,而不与载体蛋白、莱克多巴胺等反应,1A3抗体对沙丁胺醇的半数阻断浓度(IC50)>1000ng/ml。因此以1A3为ELISA试验的抗体可以有效地避免了假阳性或者假阴性的产生。利用Protein-A Sepharose亲和层析系统纯化单克隆抗体1A3,间接竞争ELISA的IC50为12.0ng/ml,检测线形范围为0.5~100 ng/ml。采用辣根过氧化物酶(HRP)标记提纯的1A3单克隆抗体,建立的间接竞争ELISA检测方法具有良好的特异性和敏感性,间接竞争ELISA的IC50约为3.5ng/ml,对CL标准品的检测下限可达0.2ng/ml,检测线性范围为0.2ng/ml~16ng/ml。