大豆遗传转化体系优化及过表达AtWUSCHEL基因诱导大豆根再生植株的探索

来源 :中国农业科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:dlfb
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大豆是重要的油料作物和高蛋白粮饲兼用作物,由于种质资源的限制,传统育种方法在改善大豆品质、提高产量及抗病虫害等方面进展缓慢,需要借助生物技术育种手段加以改进。高效的大豆遗传转化技术是进行生物技术育种的前提,然而,大豆是公认的难转化作物,转化效率低制约着大豆分子育种的发展。本研究通过优化农杆菌介导的大豆子叶节转化体系,提高了大豆遗传转化效率,同时在大豆中过表达拟南芥AtWUS基因,以期促进大豆根再生植株,为用发根农杆菌转化大豆搭建技术平台。主要研究结果如下:1.在优化子叶节转化体系过程中,发现大豆外植体的发芽天数影响转化效果,发芽1d的大豆和发芽5d的大豆作为外植体进行农杆菌侵染,虽然转化效率差异不显著,但发芽1d的大豆可以减少污染、缩短转化流程;划伤次数过多会在划伤部位形成愈伤组织块,抑制丛生芽的产生进而降低转化效率;在筛选培养基或伸长培养基中添加AgNO3可以延缓试管苗的叶片衰老,有利于丛生芽的伸长;培养皿盖下面凝结的水汽过多时,会使叶片黄化脱落,影响伸长苗的健康状况,移栽不宜成活,影响转化效率,通过在培养架上隔层开灯培养和避免冷风直吹可以解决培养皿盖水汽凝结的现象;不同大豆品种对细胞分裂素6-BA的敏感性不同,从而影响转化效率。本研究发现,供试基因型自贡冬豆进行芽诱导时所需细胞分裂素浓度要高于吉林小粒1号和Williams 82;在侵染培养基中添加有机硅表面活性剂Silwet未能增加大豆子叶节转化体系的转化效率。2.根据NCBI数据库中公布的AtWUS基因序列,克隆了拟南芥WUS基因并构建了植物表达载体,用其对大豆植株进行遗传转化,获得过表达拟南芥WUS基因的转基因大豆植株。尽管大部分过表达WUS基因的T0代转基因植株生长发育正常,但外源基因在T1代中的检出率很低。同前人的研究结论相似,有些过表达WUS基因的植株表型发生变化,生长发育缓慢,叶色浓绿,叶片向外翻卷,叶腋处出现成簇生长、不能正常发育的果荚,并有多心皮现象等。WUS基因的过表达提高了大豆CLV3基因的表达水平。部分植株(Williams 82)的离体根在不含任何外源激素的培养基里可以形成叶状结构。
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