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桑树是养蚕业的重要原料,也是药食两用的经济林作物,在食品保健、畜禽饲料、生态修复等方面得到了广泛的应用,且越来越受到人们的重视。桑花叶病是一种桑树病毒病,会导致桑树产生叶质量变差、产量下降、植株矮小和桑树抵抗力下降等问题,严重制约着蚕桑产业的健康稳定发展。在桑树产业蓬勃发展的新形势下,桑花叶病的发生规律、检测技术和防控手段等问题都亟待解决。本研究收集了广东、广西、海南、重庆四个省区共16个县市以及华南农业大学桑园不同季节的具有皱缩和花叶症状的182份桑叶样品、3份桑枝条样品以及3份蓟马与叶蝉两种桑园害虫。首先利用密度梯度离心对收集的病叶中的病毒进行分离纯化,使用电子显微镜进行形态特征观察,并按照柯赫式法则对分离病毒的致病性进行回感验证。接着,通过PCR检测以及高通量测序对桑病叶中病毒种类进行分析和确认,并对四个省区29份桑病叶样品中的病毒进行了全基因组测序和生物信息学分析。最后,根据病毒保守的核苷酸序列,设计特异检测引物,建立PCR及qPCR检测方法,并对182份桑叶样品、3份昆虫和桑组织样品进行PCR检测,分析病毒与病状、季节、地理等因素之间的关系并探究病毒的传播规律。获得的主要研究结果如下:(1)分离纯化获得一种桑花叶病的病毒样本,经电镜观察,病毒为二联体形态,病毒粒子长为27.84±1.71 nm,宽为17.05±1.13 nm,这符合双生病毒科病毒粒子的形态特征(2)PCR检测以及高通量测序结果显示,皱缩和花叶状的桑叶中均同时存在两种病毒,即双生病毒科(Geminiviridae)的桑花叶型萎缩病相关病毒(mulberry mosaic dwarf associated virus,MMDaV)和正番茄斑萎病毒属(Orthotospovirus)的桑脉带相关病毒(Mulberry vein banding associated virus,MVBaV)。(3)对四个省区29份MMDaV进行全基因组测序和生物信息学分析的结果显示,MMDaV病毒存在明显的地理差异,分别归为华南株系HNZX和华东株系HDZX两大类群,而广东、广西和海南地区则同时存在MMDaV的两大株系。(4)根据MMDaV外壳蛋白基因和MVBaV核壳体蛋白基因核酸序列,设计特异PCR和qPCR检测引物,并分别构建阳性检测质粒。其中,MMDaV的PCR特异引物检测到的质粒浓度为1×10~-66 ng/μL,qPCR的有效质粒检测浓度为1×10~-66 ng/μL。MVBaV的PCR特异引物检测到的质粒浓度为1×10~-55 ng/μL。(5)对采集的182份桑叶样品、3份蓟马与叶蝉等样品进行PCR检测的结果显示,MMDaV和MVBaV两种病毒存在混合侵染,其中MMDaV在皱缩和花叶两种症状的桑叶中普遍存在,而MVBaV仅在花叶状的桑叶中普遍存在。MVBaV受季节温度影响明显,高温条件下存在明显的潜隐现象。蓟马和叶蝉中均携带这两种病毒,病毒可在桑树根部越冬,来年随桑树的生长而繁殖。全文创新之处:研究发现桑花叶病的病叶中同时存在MMDaV和MVBaV两种病毒;建立了MMDaV病毒检测技术(专利申请号:201711281273.8)和MBVaV病毒检测技术(专利申请号:201810552526.9)。