研究背景:膀胱癌是泌尿系常见的恶性肿瘤之一。miRNAs是一类非编码小RNA分子,且成为肿瘤形成的重要调节基因。越来越多的证据表明miR-218在人类多种肿瘤中发挥抑癌因子的作用。然而,miR-218在膀胱癌中的作用仍然不清楚。本研究目的是探讨miR-218对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。方法:采用定量RT-PCR方法检测27对膀胱癌及癌旁正常组织中miR-218的表达量。构建慢病毒pHBLV-U6-ZsGreen-Puro-miR-218载体及其对照载体,并转染膀胱癌T24和EJ细胞。采用定量RT-PCR方法检测转染细胞中miR-218和BMI-1的表达量。运用western blot实验检测BMI-1、PTEN、AKT和磷酸化AKT(pAKT)蛋白表达量。运用体外的细胞增殖实验、克隆集落形成实验、划痕实验、Transwell实验和体内裸鼠成瘤实验评估miR-218对膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响。运用生物信息学预测miR-218的潜在靶点。用双荧光素酶报告基因实验验证BMI-1是否为miR-218的直接靶基因。运用HE染色和免疫组织化学染色评估裸鼠移植瘤的组织增殖情况。结果:膀胱癌组织中miR-218的表达量明显低于癌旁正常膀胱组织的表达量。qRT-PCR结果显示转染miR-218膀胱癌细胞系内的miR-218表达量比对照组高出250倍左右,表明稳定过表达miR-218膀胱癌细胞建立成功。通过体外的细胞增殖实验、克隆集落形成实验、划痕实验、Transwell实验和体内裸鼠成瘤实验表明过表达miR-218明显抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。双荧光素酶报告基因实验数据显示miR-218 mimics能明显减弱野生型BMI-1 3‘-UTR质粒的荧光强度,而对突变型BMI-1 3’-UTR质粒的荧光强度没有影响,证实BMI-1为miR-218的直接靶基因。另外,我们发现miR-218抑制BMI-1的表达以及其下游靶蛋白PTEN的表达,且参与pAKT的调节。HE染色结果显示过表达miR-218瘤体细胞核比对照组的更小。免疫组织化学染色结果表明核增殖抗原Ki-67在过表达miR-218瘤体内的表达量明显低于对照组。结论:我们的研究证实了miR-218在膀胱癌中表达下调且通过靶向抑制BMI-1而作为膀胱癌的抑癌基因。因此,miR-218/BMI-l轴为膀胱癌的诊断和治疗提供了一个新策略。