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背景与目的食管癌主要包括食管鳞癌(Esophageal Squamous Cell Carcinoma,ESCC)和食管腺癌两种病理类型,其中ESCC是我国食管癌最主要的类型,约占95%[1]。全球癌症统计报告2018年有572034人数新诊断为食管癌、癌症相关死亡人数为508585[2]。由于肿瘤异质性较高[3,4],并且大多数病人初次诊断时已为晚期,因此食管癌的治疗效果并不理想。目前的治疗方法主要包括手术、放化疗[5],免疫治疗也正在开展临床试验,以期提高病人的5年生存率和生活质量。相关研究认为食管鳞癌的发生是饮食习惯、营养状态、吸烟、饮酒、牙龈卟啉单胞菌感染、基因的扩增或突变等环境因素与基因相互作用的结果[6-8]。越来越多研究结果的发布,让我们认识到食管鳞癌的发生发展并不仅限于这些因素。miRNA是一种在组织中广泛表达的小的非编码单链RNA,参与生物体内诸多过程,miRNA的异常表达与多种疾病的发生相关[9,10],在癌症中可以充当癌基因或抑癌基因的作用。微小RNA-182-5p(miR-182-5p)属于miRNA家族中的一员,已经证实在多种恶性肿瘤的发生发展中发挥着关键的调节作用,并且在不同的瘤种中miR-182-5p的表达水平及调节机制并不完全一致,可以作为恶性肿瘤潜在的治疗靶点以及诊断、预后的生物标志物。而miR-182-5p在食管鳞癌中的研究却鲜有报道,因此我们检测了 ESCC组织和细胞中的miR-182-5p表达水平,以相应的正常食管上皮组织和正常食管上皮细胞为对照,分析并比较了 miR-182-5p的表达水平,探讨了微小RNA-182-5p(miR-182-5p)对食管鳞癌(ESCC)细胞增殖和侵袭的影响,并阐释其可能的分子机制。资料与方法选取2013年6月至2018年5月在郑州大学第一附属医院手术切除的52例ESCC组织及相应的52例正常食管上皮组织,郑州大学第一附属医院食管癌防治重点实验室液氮中保存的ESCC细胞(Eca109、EC9706、TE1、KYSE70和KYSE450)和正常食管上皮细胞Het-1A。临床资料通过医院病案室查阅患者病历获得。采用逆转录定量聚合酶链反应(Reverse Transcription Quantitative Polymerase Chain Reaction,RT-qPCR)检测ESCC组织和细胞中 miR-182-5p 的表达。将miR-182-5p抑制剂、miR-182-5p mimic和阴性对照转染食管鳞癌Eca109和TE1细胞,RT-qPCR检测转染后ESCC细胞中miR-182-5p的表达水平,细胞计数试剂盒8检测转染后ESCC细胞的增殖情况,Transwell小室检测ESCC细胞的侵袭能力。采用双荧光素酶报告实验分析miR-182-5p与细胞黏附分子2(cell adhesion molecule 2,CADM2)直接的相互作用,RT-qPCR 检测 CADM2 在 ESCC 组织中的表达,并分析其与miR-182-5p表达的相关性,Western blot检测转染后CADM2、FAK、p-AKT和AKT蛋白的表达。使用GraphPad Prism 8.0软件进行统计学分析。结果1.与正常组织相比,ESCC组织中miR-182-5p的表达水平显著高于正常组织,差异均具有统计学意义(P＜0.0001)。2.以ESCC组织中miR-182-5p表达水平的中位数为界值,根据中位数分组后进行生存分析,Log-rank检验分析结果显示miR-182-5p高表达的ESCC病人的5年生存率显著低于miR-182-5p低表达患者,差异具有统计学意义(P＜0.05)。3.相关性分析显示miR-182-5p的表达水平与ESCC病人的TNM分期和淋巴结转移均密切相关(P＜0.05),与病人的性别、年龄、抽烟史、饮酒史和分化程度均无关(P＞0.05)。4.RT-qPCR分析5株ESCC细胞和1株正常食管上皮细胞中miR-182-5p的表达水平,结果显示5株ESCC细胞中miR-182-5p的表达水平均显著高于正常食管上皮细胞(P＜0.05)。尤其在Eca109和TE1细胞中miR-182-5p显著高表达。5.miR-182-5p抑制剂显著下调Eca109和TE1细胞中miR-182-5p的表达水平(P＜0.0001),miR-182-5p的表达下调显著抑制Eca109和TE1细胞的增殖和侵袭能力(P＜0.05),而miR-182-5p mimic显著上调Eca109和TE1细胞中miR-182-5p的表达水平(P＜0.0001),miR-182-5p的表达上调显著促进细胞的增殖和侵袭能力(P＜0.05)。6.CADM2 mRNA是miR-182-5p的直接作用靶点,ESCC组织中miR-182-5p和CADM2 mRNA的表达水平呈负相关关系(r=-0.5004,P＜0.001)。7.CADM2 mRNA的表达与ESCC病人的性别、年龄、抽烟、饮酒和分化程度均无关(P＞0.05),但与ESCC病人的TNM分期和淋巴结转移均密切相关(P＜0.05)。以ESCC组织中CADM2 mRNA表达水平的中位数为界值进行分组,结果发现CADM2 mRNA高表达的ESCC病人的生存率显著高于CADM2 mRNA低表达患者,差异具有统计学意义(P＜0.05)。8.下调miR-182-5p表达能显著促进CADM2蛋白的表达,但抑制FAK、p-AKT和AKT的表达水平,相反上调miR-182-5p表达能显著抑制CADM2蛋白的表达,但促进FAK、p-AKT和AKT的表达。结论1.与健康对照相比,miR-182-5p在ESCC组织和细胞中的表达水平均显著升高,能够促进ESCC细胞的增殖和侵袭。2.miR-182-5p可以作为ESCC患者临床分期、淋巴结转移和预后的候选分子标记物。3.ESCC组织中,CADM2 mRNA是miR-182-5p的直接作用靶点,表达水平与miR-182-5p 呈负相关,并通过 miRNA-182-5p/CADM2/FAK/AKT 信号途径调控 ESCC的发展。4.miR-182-5p参与ESCC的发生、发展过程,开发靶向miR-182-5p的药物可能为ESCC病人提供新的临床治疗方向。