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共轭亚油酸(Conjugated linoleic acid,CLA)是一组位置和几何异构体的十八碳共轭二烯酸的统称。其双键位于7,9;8,10;9,11:10,12:或11,13位置上,其中每个双键又有顺式和反式两种构型,即每个CLA的位置异构体有四种不同的几何异构体。因此CLA可形成多种同分异构体。 天然的CLA主要存在于反刍动物的奶、肉的脂肪中。最主要的CLA异构体为c9,t11-CLA和t10,c12-CLA。牛瘤胃中c9,t11-CLA是厌氧细菌溶纤维丁酸弧菌生物氢化亚油酸过程中的产物,此外还有一些细菌,如乳酸菌也可将亚油酸生物转化为共轭亚油酸。 CLA有多种生物活性,如抗癌、减肥、抗动脉粥样硬化、抗糖尿病和免疫调节等。近年来,对共轭亚油酸抗癌活性的研究引起了广泛的注意。 Caco-2细胞是一类人结肠癌细胞,研究中建立了Caco-2细胞无血清培养的方法。研究了亚油酸(linoleic acid,LA,纯度为96%),c9,t11-CLA(纯度为96%),t9,t11-CLA(纯度为96%),以及这两种CLA的混合物(体积比为1:1),在不同浓度(0,25,50,100,200μmol/L)、不同作用时间(1d,2d,3d,4d)下对Caco-2细胞增殖的影响以及相同浓度,相同作用时间下比较了四种物质的活性。同时检查了CLA混合物对Caco-2细胞凋亡的诱导作用。 本研究采用MTT法分析CLA对Caco-2细胞增殖的抑制作用;通过透射电镜观察Caco-2细胞凋亡的形态学变化,同时通过流式细胞仪定量检测Caco-2细胞的凋亡率;采用RT-PCR的方法分析了在加入CLA的混合物后,Caco-2细胞caspase3 mRNA的表达水平的变化。 研究结果表明,四种实验物质在不同浓度、不同作用时间下均可抑制Caco-2细胞的增殖,其对Caco-2细胞增殖的抑制作用与作用时间(p<0.05)和浓度有密切关系。在相同浓度、相同作用时间时,四种物质对Caco-2细胞的抑制活性顺序从大到小分别为:CLA异构体混合物,t9,t11-CLA,c9,t11-CLA,及LA。透射电子显微镜和流式细胞仪的结果表明,CLA混合物可诱导Caco-2细胞产生凋亡,并且与CLA混合物的浓度和作用时间呈依赖关系。RT-PCR的结果表明,