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第一部分:更具侵袭转移能力的人膀胱癌细胞的筛选目的:体外筛选出更具侵袭转移能力的膀胱癌T24-C细胞系,探讨uPA系统在膀胱癌细胞系中的表达及其在侵袭转移中的作用。方法:使用Transwell小室对T24细胞系进行筛选,筛选出更具侵袭转移能力的膀胱癌细胞,命名为T24-C细胞系;MTT法检测T24-C细胞系与T24细胞系0.5h、1h、2h时粘附细胞的吸光度值A;使用Transwell小室检测两组细胞48小时的透膜细胞数;RT-PCR检测膀胱癌T24与T24-C细胞系uPAmRNA的表达。结果:T24-C细胞系与T24细胞系相比,两组细胞的吸光度值A,在0.5h时无显著性差异(P=0.092);1h、2h时有显著性差异(P＜0.05):两组细胞48小时的透膜细胞数相比,有显著性差异(P＜0.01),T24与T24-C细胞系uPA mRNA的表达有显著性差异。结论:通过体外筛选更具侵袭转移能力的膀胱癌细胞是可行的,uPA系统在膀胱癌的侵袭转移中发挥着重要作用。第二部分:uPA合成抑制剂Amilorde在体外对膀胱癌T24-C细胞系的抑制作用目的:研究uPA合成抑制剂阿米洛利(Amilorde)在体外对T24-C细胞系粘附性、侵袭转移能力的影响方法:MTT法检测T24细胞系200μmol/L阿米洛利实验组与对照组在0.5h、1h、2h时黏附细胞的吸光度值A;使用Transwell小室检测T24细胞系在不同浓度的阿米洛利(0μmol/L、100μmol/L、150μmol/L、200μmol/L、250μmol/L)作用48h后的透膜细胞数。RT-PCR法测膀胱癌T24-C细胞系uPAmRNA的表达。结果:MTT结果显示实验组与对照组相比,两组细胞在0.5h、1h、2h时黏附细胞的吸光度值A有显著性差异(P＜0.01);由Transwell小室的实验结果表明对照组与各实验组比较48小时透膜细胞数有统计学意义(P＜0.01);实验组中,200μmol/L组与250μmol/L组,两组间比较无统计学意义(P=0.841);其余各实验组间相比P＜0.01,有统计学意义。不同浓度阿米洛利作用T24-C细胞24h后,与对照组相比,100、150、200、250μmol/L阿米洛利实验组uPAmRNA表达明显下调,差异有统计学意义(P＜0.05),实验组中,200μmol/L组与250μmol/L组相比无显著性差异(P=0.781)其他组间有显著性差异(P＜0.01)。结论:阿米洛利有明显抑制人膀胱癌细胞T24系黏附、侵袭转移,其最适作用浓度为200μmol/L,更高的药物浓度不能使抑制细胞的黏附性、侵袭转移能力进一步增强。